要:本文基于品种植物形态差异、品种间多糖含量差异、气候与土壤差异以及分子生物学差异对玉竹品质进行评价,为建立一套完整且能够综合反映玉竹产品质量变异的质量控制标准提供理论基础。具体而言,以多糖含量为主要指标,借助不同检测方法指纹图谱,如TLC指纹图谱、DNA纹图谱及HPLC指纹图谱等,对玉竹进行“模糊性”和“整体性”的定量定性相结合的分析;以过相似性和相关性对比,发现质量变异和缺陷,进而对玉竹质量进行有效的控制。关键词:玉竹;品质;指纹图谱Researchprogressodo,口tHm(Mill.)DruceLIUYing.jiao,XUBei,XIELi-juan,GONGLi—min,YUYa—fei,LIUTa—si。(HunanUniversityChineseMedicine,Changsha410208)Abstract:completequalitycontr01standards,odD,.n£M,,£(1vIDrucehasbeenevaluatedbaseda11kindsdifferenceswhichincludesplantmorphologicaldifferences,polysaccharidecontentdifferencesbetweenvarieties,climatesoildifferencesmolecularbi0109ydifferences.Specifically,basedmainindex,polysaccharidecontentdifferences,differentfingerprintdetectionmethod,TLCfingerprint,DNAfingerprintHPLCfingerprintotherswereused.Theaimthosedetectionsanalysisthe“fuzziness”and“integrity’’ofPoZygo7n(Mill.)DrucecombiningquantitatiVequalitatiVeanalysis.Also,thereasonableeValuationPDZygo,l口£“mDdor口£“7n(Mill.)Druce.qualityVariationdefectsthroughcorrelationcontrast.Keywords:PoZygoodorn£t‘,n(Mill.)Druce;Quality;Fingerprint玉竹(PoZygon植物,因该植物形态似竹、光莹如玉,故名玉竹[1].为我国传统常用中药材。
玉竹味甘,微肺、胃经。养阴润燥,生津止渴。用于肺胃阴伤,燥热咳嗽,咽干口渴,内热消渴‘2。。玉竹含有多种物质,目前已从玉竹中分离了多糖、黄酮、皂苷、生物碱等成分,其中多糖是其中主要成分。现代药理研究表明玉竹可以降血糖、扩张血管等作用,除此之外,玉竹还能够提高免疫力、抗肿瘤以及抗衰老,因而被开发成为多种保健食品,诸如玉竹饼干、玉竹茶、玉竹酒等。玉竹作为药食两用的药材,随着生活水平的提高其经济价值也得到不断的提高。作者简介:刘应蚊,男,硕士研究生,主要从事中药资源与鉴定研究,Tel:18711046824。E-mail:1iuyingjiaojiao@sina.com通讯作者:**斯.女,教授,博士生导师,主要从事中药资源与鉴定研究.Tel:13036794420,E—mail:liutasi@126.com.264玉竹在我国广泛分布于华中、华东,向北可分布至东北、华北、西北,国外分布于朝鲜、日本、俄罗斯、蒙古及一些欧亚国家,是一种广泛分布于欧亚大陆的植物[3]。经调查,在我国的吉林、陕西、山西、河北、湖北、湖南、四川、浙江等省都有正品玉竹生长或种植,种植历史悠久,广大科技者和药农也在实践中不断开发出新的玉竹品种,然而不同品种玉竹在外形上极为相似,因而在商品流通中往往存在着以非优质的其它品种冒充优质品种、同属黄精当玉竹使用以及混淆品伪品掺杂等现象,因此在传统方法即形态鉴别的基础上采用仪器分析方法,克服传统鉴定方法的不足,为加强玉竹在商品市场上的流通、规范化栽培中品种的选育、优质品种资源在地区间的推广提供可靠的依据。
品质因素影响1.1品种植物形态差异陈斌龙等n]通过田间观察发现浙江玉竹在植物形态学方面与湖南玉竹有一定差异,诸如在生育期、叶形、花序、茎杆颜色等方面两者均存在一定的差异,尤其在开花习性方面,浙江玉竹一般开两朵花,整株开花较多。刘塔斯等[51将湖南省栽培玉竹和野生玉竹进行比较,发现二者的不同点主要有:栽培品较野生品粗,节间距较长,茎痕较大,颜色较深。显微鉴别特征方面,栽培玉竹导管较长,气孔较多,针晶较长且较粗,而野生玉竹粘液细胞较多。王艳玲等[6]针对不同品系及不同生长年限关玉竹进行品质比较,在引进野生关玉竹进行人工栽培时,宜选择长叶玉竹,且栽后第年采收其品质和产量均较好,明确优良栽培品系玉竹的最佳采收年限。1.2品种间玉竹多糖含量差异林晓莲等[7]将栽培玉竹与野生品种比较,从紫外吸收图谱看栽培与野生玉竹峰形相似;以水、氯仿为溶剂时,野生玉竹的最大吸收峰及吸收值比栽培玉竹要大,以乙醇为溶剂时,野生和栽培的相差不大,以石油醚做溶剂时,野生的吸收值较小。含量分析上野生玉竹的玉竹多糖含量比栽培玉竹要将云南、四川、广东与湖南各地不同玉竹品种进行比较,发现湖南产的玉竹多糖含量较高,野生品含量高于栽培品。
但由于野生药材资源有限,且根茎纤细,产量不高,不能满足市场的需求,故供应商多青睐栽培品玉竹。溶性多糖含量也显著高于其他栽培品种,是生产上值得大力推广的优良品种。野生玉竹虽然根茎小、产量低,但出干率高、水溶性多糖含量高、抗病性强,可以作为玉竹新品种选育的亲本材1.3气候与土壤差异卜静[10]等采用逐步回归、主成分分析和灰色关联度分析等方法,研究不同产地野生玉竹的有效成分(多糖、水溶物和醇提物)含量和抗氧化活性与主要生态因子(1月均温、7月均温、年降水无霜期、土壤pH和全钾含量)的相关性,与土壤因子相比,气候因子对种有效成分含量的影响较大,土壤全钾含量是对玉竹有效成分含量直接影响最大的因素,年降水量是最主要的决策因素,1均温是最主要的限制因素。为玉竹GAP提供可靠的依据。1.4分子生物学差异潘清平等[11]通过ISSR分子标记技术将野生玉竹、栽培品及其混淆品的玉竹加以区分。卜静‘吲也对中国不同居群野生和栽培玉竹种质资源进行ISSR分析,不同产地野生玉竹种间存在较高的多态性,遗传多样性较为丰富;野生玉竹的遗传多样性高于栽培居群的遗传多样性。周哗m3等还用原植物鉴定、随机扩增多态性DNA(RAPD)、简单序列重复(ISSR)手段,对随机引物进行筛选,通过l。
8%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,经PCR扩增产生足够的多态性谱带用于分析,RAPD,ISSR方法可以从分子水平区分黄精属药用植物,不同产地的玉竹、小玉竹、多花黄精出现了一定程度的变 异。还有陈存武[143 等采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对皖西大别山区六种黄精属植物的抗坏血酸氧化酶 (AOD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、酯酶(EST)和过氧化物酶(POD)五种同 265工酶进行了比较分析,得出五种同工酶共显示出 66 条酶带,其中有 指纹图谱中药指纹图谱(TCM Fingerprint)鉴定是由法医学的 DNA 指纹图谱而来的,它是指中药原料 材、饮片、半成品、成品等经适当处理后,采用一定的分析手段,得到的能够标示该中药特性的共有 峰的图谱,是一种新的中药质量控制模式,也是一种综合的、可量化的化学(不包括生物学) 鉴定手 段。借以评价中药材质量的真实性、优良性和稳定性,“整体性”和“模糊性”为其显著特 点。由于 中药的有效成分大多尚未明确,中药指纹图谱的“整体性”和“模糊性”正好符合中药质 控的要求, 较单一的控制一种或几种成分的方法更具有科学性和全面性。中药指纹图谱不但有特征的 体现而且还可 以用作定性鉴别使用,还体现了量的概念。
把定量和定性相结合可以使中药指纹图谱具有 更大的作用。 中药指纹图谱可以进行个体的和某一物种的唯一性鉴定,也可以将其量的特征和其它体系 相挂钩。 杨先国[1s]等采用薄层色谱法,甲苯一醋酸乙酯一甲酸(5:4:1)为展开剂,氨水熏蒸显色,用 xn=500 nm,Xs 一280 nm 双波长扫描。建立了由10 个特征荧光斑点构成的玉竹黄酮类成分的薄层 纹图谱,该方法可以有效地鉴别玉竹,并评价其质量。张艳秋[163等采用 Mnz+一CH。 COCH,一 BrO。一为振荡体系,以待测草药为反应底物,应用电化学工作站记录化学振荡体系中的电位随时间的 变化,获得草药电化学指纹图谱,利用草药不同部位的电化学指纹图谱特征参数( 诱导时间、振荡寿 命、最大振幅等)有明显差别进行质量评价。玉竹各部位的电化学指纹图谱振荡行为完全不同,玉竹 根的振荡寿命远大于其叶,因此玉竹以根茎入药。这为草药选取合适有效的药用部位提供了参考,另 一方面扩大了草药的应用或用药部位,使中草药资源得到充分利用。 郑培和[17]等利用高效液相色谱技术对不同品系玉竹(长叶玉竹和圆叶玉竹)的化学成分进行研 究,建立玉竹药材指纹图谱。比较了长叶玉竹和圆叶玉竹的 210 nm HPLC 对照谱图,发现 谱图总体类似,共有峰数相同,但也有细微差别,这种差异主要体现在检出色谱峰数量上不同,平均 相似度为 o.794,可看出不同品系玉竹在化学成分上存在一定差别。刘婷[”]等对湘玉竹进行 HPLC指纹图谱分析,标定 10 个共有指纹峰。并考察了提取方法、流动相的选择、检测波长的选