珍珠龙胆石斑鱼幼鱼的高植物蛋白饲料中鱼溶浆粉的应用近年来,随着水产养殖业的发展,对鱼粉需求量逐年增加,而全球渔业资源衰退导致鱼粉产量逐年下降,限制了水产饲料中鱼粉的添加量,为了替代鱼粉,国内外进行了大量研究用动植物原料替代鱼粉[1],但蛋白酶抑制剂、凝集素、植酸、皂苷等抗营养因子的存在[2,3],氨基酸的不平衡,脂肪饱和度较高,牛磺酸、羟脯氨酸等促生长因子的缺乏等[4],导致水产动物生长受阻,因此,海洋资源产品的开发成为研究的新浪潮,而鱼溶浆作为鱼粉副产品,成为鱼粉的理想替代品。新鲜海鱼的含水量在70%左右,在鱼粉生产过程中,经过蒸煮、压榨,大量的水溶性物质被分离在压榨液中,经酶解浓缩固化后形成鱼溶浆粉,与植物蛋白源相比,鱼溶浆粉不存在抗营养因子[2],与其它动物蛋白源相比,鱼溶浆保留了鱼粉特有的未知促生长因子和生物活性物质,其特有的鱼腥香味和诱食因子,对水产动物具有很好的诱食和促生长作用,此外,鱼溶浆粉含有植物蛋白源所没有的小分子多肽、核苷酸、牛磺酸以及矿物质等有益成分,可增强动物消化吸收,促进肠道发育,增强免疫机能和抗应激能力,是优质的动物蛋白源、诱食剂和营养补充剂[5,6]。有效利用海洋蛋白源是缓解鱼粉资源短缺和保障水产养殖业可持续发展的重要途径。

珍珠龙胆石斑鱼(EpinephelusfuscoguttatusE.lanceolatu)又称龙虎斑或珍珠斑,隶属于鲈形目(Perciformes)鲈亚目(Percoidei)鮨科(Serranodae)石斑鱼属(Epinephelus),是由鞍带石斑鱼(Epinepheluslanceolatu)为父本,棕点石斑鱼(E.fuscoguttatus)为母本杂交而来,其肉质细嫩、成长快速、抗病力强,集合了虎斑抗病力强和龙胆生长快速的优点,显现杂交优势,极具发展潜力[7,8],是中国海南、福建、广东等地的传统养殖品种。珍珠龙胆石斑鱼是肉食性鱼类,其饲料中鱼粉的添加量较高,目前国内外均未见有珍珠龙胆石斑鱼高植物蛋白饲料中添加鱼溶浆粉的研究报道。本研究通过在高植物蛋白饲料中添加少量鱼溶浆粉,以期达到降低珍珠龙胆石斑鱼饲料鱼粉使用量及降低饲料成本的目的。1、材料与方法1.1实验饲料以白鱼粉、大豆浓缩蛋白为主要蛋白源,鱼油为主要脂肪源,以添加60%的白鱼粉为对照组(DF),各处理组用大豆浓缩蛋白替代30%白鱼粉,并添加0(D0)、2.5%(D2.5)、5%(D5)、7.5%(D7.5)及10%(D10)的鱼溶浆粉(购于荣成市海圣饲料有限公司,营养成分见表1),用酪蛋白调节蛋白平衡,鱼油调节脂肪平衡,配制成组等氮等能的实验饲料。

所有原料粉碎后过80目,逐级混匀后,加入新鲜鱼油和蒸馏水再次混匀,经螺旋挤压机加工成直径为5mm左右两种规格的饲料颗粒,60烘干并保存于-20冰箱备用。饲料配方及营养组成见表2,氨基酸组成见表3。饲料配方及营养组成(干物质基础)续表2实验饲料氨基酸组成(干物质基础)注:C.色氨酸、谷氨酰胺及天冬酰胺未能检测出,下同。1.2饲养管理养殖实验在山东省海洋资源与环境研究院东营实验基地循环水养殖系统内进行,选用同一批次的珍珠龙胆石斑鱼幼鱼,用对照组(DF组)和D0组饲料驯养2周,驯养期间逐渐降低DF组比例,增加D0组比例,正式实验开始前挑选出540尾则始体重(Initialbodyweight,IBW)为(23.720.09)g大小均匀、体质健壮的珍珠龙胆石斑鱼幼鱼,随机分为个重复,每个重复30尾鱼。养殖实验进行56d,每天定时定量(则始投喂量为体重的2%左右,根据摄食情况调整投喂量)投喂16:30),投喂30min后排残饵,数颗粒并计算残饵量。驯养及实验期间控制水温16～18,溶氧6mg/L,pH为7.6～8.2,氨氮0.05mg/L,亚硝酸氮0.05mg/L,光照周期为自然光周期。1.3样品采集实验结束后,禁食24h,每桶鱼计数并称末体重(Finalbodyweight,FBW),计算存活率和增重率。

每桶取15尾鱼,测量体长、体重,计算肥满度,随机取静脉取血后分离肌肉,所有操作均在冰盘内完成。血液于4静置4h后离心(4000r/min,10min)取上清液。另每桶随机取尾鱼,取前肠0.8cm左右并固定于Bouin's液中,24h后转移到70%酒精中,经脱水、透明、浸蜡、包埋后,进行常规石蜡连续切片,切片厚度为7.0μm,然后经H.E.染色后,中性树胶封片并编号,在徕卡高清摄像系统(LEICAICC50HD)下观察并拍照。1.4实验方法与计算公式增重率(Weightgainrate,WGR,%)=[末体重(g)-则体重(g)]100/则体重(g);特定生长率(Specificgrowthrate,SGR,%/d)=[ln末体重(g)-ln则体重(g)]100/养殖天数(d);饲料系数(Feedconversionratio,FCR)=摄食饲料总量(g)/[末体重(g)-则体重(g)];蛋白质效率(Proteinefficiencyratio,PER)=[末体重(g)-则体重(g)]/[摄食饲料总量(g)饲料蛋白含量(%)];肝体比(Hepatosomaticindex,HSI,%)=肝脏质量(g)100/末体重(g);脏体比(Viscerosomaticindex,VSI,%)=内脏质量(g)100/末体重(g);肥满度(Conditionfactor,CF,g/cm3)=体重(g)100/体长(cm)3;存活率(Survivalrate,SR,%)=成活尾数100/总尾数。

鱼溶浆粉肽含量及分子量分布由中国广州分析测试中心检测(凝胶色谱法),饲料及背肌氨基酸采用HITACHIL-8900氨基酸分析仪测定;血清总抗氧化能力(Totalantioxidantcapacity,T-AOC)、超氧化物武化酶(Superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、酸性磷酸酶(Acidphosphatase,ACP)活性均采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定;血清总蛋白(Totalprotein,TP)、白蛋白(Albumin,ALB)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、胆固醇(Cholesterol,CHOL)、高密度脂蛋白胆固醇(High-densitylipoproteincholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-densitylipoproteincholesterol,LDL-C)含量、谷丙转氨酶(Alaninetransaminase,ALT)、谷草转氨酶(AspartateAminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase,AKP)活性均采用日立全自动生化分析仪(7020型,Hitachi)测定,试剂购自北京利德曼生化股份有限公司。

1.5数据分析所有数据采用SPSS18.0进行单因素方差分析(One-wayANOVA),用Duncan's 检验进行多重 比较分析,P0.05 认为差异显著,P0.05 认为差异不显著。统计数据以平均值标准误 (MeansSE)的形式表示。 2、结果 2.1 生长性能、饲料利用、形体指标及存活率 可见,高植物蛋白饲料中添加一定量的鱼溶浆粉,能显著改善鱼粉含量低引起的珍珠龙胆石斑鱼幼鱼生长下降。D0 和D2.5 组的增重率和特定生长率显著低于对照组(P0.05), 当鱼溶浆粉添加量为5%以上时,增重率和特定生长率与对照组差异不显著(P0.05);各组间 饲料系数和蛋白质效率差异不显著(P0.05);D5、D7.5、D10 组差异不显著(P0.05),但显著低于D0 组(P0.05),D2.5 组与各组差异均不显著(P0.05),D0 和D2.5 体比显著高于其它各组(P0.05);D0组肥满度显著低于DF 组(P0.05),添加鱼溶浆粉的各组 与DF 组差异不显著(P0.05);不同处理组珍珠龙胆石斑鱼幼鱼的存活率差异不显著 (P0.05)。 2.2 全鱼及背肌营养成分 2.2.1 全鱼及背肌基本营养组成 可见,不同处理组之间全鱼水分、粗脂肪、粗灰分差异均不显著(P0.05),添加鱼溶浆粉的各组全鱼粗蛋白均显著高于 DF D0组(P0.05);不同处理组间背肌水分、粗蛋白、 粗脂肪及粗灰分均无显著差异(P0.05)。

2.2.2 背肌氨基酸组成 可见,高植物蛋白饲料中添加鱼溶浆粉对石斑鱼幼鱼背肌各种氨基酸含量影响均不显著(P0.05),对必需氨基酸总和、非必需氨基酸总和及总氨基酸影响也均不显著(P0.05)。 高植物蛋白饲料中添加鱼溶浆粉对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼生长性能、饲料利用、形体指标及存活率的影响 注:表格中同一行上标相同小写字母或无字母表示差异不显著(P0.05),不同小写字母表示差 异显著(P0.05),下表同。 高植物蛋白饲料中添加鱼溶浆粉对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼背肌氨基酸组成的影响2.3 血清生化指标 高植物蛋白饲料中添加鱼溶浆粉对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼血清生化指标的影响见表7。由表 可见,各处理组血清TP差异显著(P0.05),D0 组显著低于对照组(P0.05),D2.5 对照组差异不显著(P0.05),但显著高于D0 组(P0.05),D7.5 组显著高于其它各组(P0.05)。 各组间白蛋白差异不显著(P0.05)。D7.5 TG含量显著高于其它各组(P0.05)。 DF CHOL最高,显著高于其它各组(P0.05),D7.5 D10组显著高于D0 组。DF LDL-C均显著高于其它各组(P0.05),D2.5 LDL-C显著低于D7.5 D10组(P0.05),显著高于D0 组(P0.05)。

D0 组的ALT 和AST 最高,均显著高于DF 和D10 D7.5组之间差异不显著(P0.05)。 2.4 非特异性免疫指标 D10组T-AOC 显著高于对照组(P0.05),D10 组最高,D2.5 与对照 组差异不显著(P0.05),D0 组显著低于其它各组(P0.05)。D0 组T-SOD 与D2.5 组差异不 显著(P0.05),显著低于其它各组(P0.05)。D0 MDA含量最高,显著高于对照组 及D10 组(P0.05),D10 组与对照组差异不显著(P0.05)。各处理组间ACP ALP无显著 差异(P0.05)。 高植物蛋白饲料中添加鱼溶浆粉对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼血清非特异性免疫指标的影响2.5 肠道组织结构 可见,随着鱼溶浆粉添加量的增加,珍珠龙胆石斑鱼幼鱼肠道皱襞数目呈先升高后降低趋势,D0 组和D2.5 组显著低于DF 组(P0.05),D5、D7.5 及D10 组与对照组差异 不显著(P0.05),以D7.5 组最高。D0 组皱襞高度显著低于其它各组(P0.05),添加鱼溶浆粉 的各组与对照组差异均不显著(P0.05)。D0 组肌层厚度最低,但与其它各组差异不显著 (P0.05)。