天麻为兰科植物天麻Gastrodia elata Bl.的干燥块茎。收载于2005版《中国药典》一部中,含量测定方法为高效液相色谱法,以天麻素为对照品。文献报道的方法主要有高液相色谱法、薄层扫描法、分光光度法等。

一、 高液相色谱法

⑴2005版《中国药典》天麻含量测定项下

色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.05%磷酸溶液(3:97)为流动相;检测波长为220nm。理论板数按天麻素峰计算应不低于5000。

供试品溶液的制备:取本品,在80℃减压干燥,粉碎,取粉末(过四号筛)约0.8克,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇50ml,称定重量,加热回流提取3小时,放冷再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,滤过,取续滤液10ml,浓缩至近干,残渣加乙腈-水(3:97)混合溶液溶解,转移至10ml量瓶中,并用乙腈-水(3:97)混合溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

⑵文献报道的HPLC法

马涵涛等采用HPLC法测定脑康泰颗粒中天麻素的含量。日本岛津LC一1OAT 高效液相色谱仪,SPD-10A 紫外检测器,C-R6A 型处理机。色谱柱:Shim-pack CLC-ODS(150mm×6.0mm),流动相:甲醇-磷酸盐溶液(0.1mol/L NaH2P04溶液和0.1 mol/L Na2HPO4溶液等量混合)-水(3:7:98),检测波长270 nm,柱温:4O℃,流速:0.8 mL/min。徐自升等采用HPLC测定天舒滴丸中天麻素的含量。Agilent 1100 HPLC仪,四元泵,DAD紫外检测器,全自动进样器,惠普化学工作站(HPCHEM);流动相:A泵:0.1%磷酸水;B泵:0.1%磷酸甲醇。0~15min,B%:3.0%~7.0% ;15~30min,B%:7%~100.0%;30~35min,B% :100%~0% ;后运行5min。流速为1.0Ml/min,梯度洗脱。柱温为25℃,检测波长为221nm。虽然关于天麻素的含量测定方法已经多有文献报道,但大多用的是等度洗脱法。由于天麻素的极性很大,流动相势必含水量很大,这样就容易导致色谱柱塌陷,而引起柱效下降,柱子寿命变短。徐自升等使用的方法为梯度洗脱法,可将吸附在柱子上的脂溶性杂质及时洗脱,对保持柱效有很大的帮助。所选用的Lichrospher C18 2C系列的柱子,有较好的耐水性。

文献报道的流动相系统除药典收载的外,主要有:甲醇-磷酸盐溶液-水、乙腈-水-磷酸、甲醇-水-三乙胺系统等,检测波长多为270nm、22lnm、220nm等。

二、 薄层扫描法

熊慧林等测定了天麻杜仲胶囊中天麻素的含量。采用岛津CS-9l0型薄层扫描仪,大连物化所DW-95色谱工作站,瑞士CAMAG薄层自动涂布器。硅胶G板,展开剂:醋酸乙酯-甲醇-水(9:1:0.2),显色剂:5%磷钼酸乙醇溶液,波长为600nm,单波长线性扫描。样品用甲醇超声处理。

三、 分光光度法

双波长扫描法:申玉华等测定了天芎头痛宁胶囊中天麻素的含量。采用CS-930薄层扫描仪,硅胶G薄层板,以氯仿-甲醇-醋酸乙酯(6:2:0.15)为展开剂,10%的磷钼酸乙醇溶液为显色剂,测定波长540nm,参比波长475nm。样品以无水乙醇提取,残渣用正丁醇溶解,经水提取和氧化镁吸附,排除了水溶性杂质的干扰。

二阶导数分光光度法:何丹鸿等测定了复方天麻头痛口服液中天麻素含量。采用岛津UV260型分光光度计(日本)。在200nm~250nm波长范围内,零阶吸收光潜时,处方中的其它成份对天麻索的测定有干扰;二阶导数吸收光谱时,天麻索在233nm波长处有一导数吸收峰,在此波长处其它成份无干扰。因此选233nm波长、用基线一峰法量取振幅值D,作为定量信息测定天麻素的含量。在5~25μg/mL浓度范围内,线性关系良好。

三阶导数分光光度法:袁曦等测定了复方天麻口服液中天麻素的含量。采用岛津UV260型分光光度计(日本)。在2O0~25Onm波长范围内,处方中其他成份有吸收,对天麻素测定有干扰;采用三阶导数法天麻素在229nm波长处有一吸收峰,235nm波长处有一吸收谷,其它成份在此波峰、波谷处无吸收,故选用229nm~235nm波长之间的振幅值作为测定天麻素的定量信息。


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