实验材料
试剂、试剂盒
肝素生理盐水溶液 PBS 缓冲液
仪器、耗材
实验步骤
一、试剂和材料
（二）器材
1、家兔盒，兔固定架，大小鼠固定板。
2、解剖器材大剪刀，镊子，儿科小骨钳。
3、其他器材离心管(2-10ml)，玻璃毛细管(内径1－1.5ml)，注射器（1，2，5 和10ml）及相应针头，吸管（5－10ml），滴管，匀浆机，培养皿（直径5－10ml）。
4、仪器设备离心机(4000r/min)，搅拌机(2000r/min)，大小鼠代谢笼。动物称，电子天平。
（三）试剂
1、抗凝剂0.5%肝素生理盐水溶液。
2、生理盐水或PBS 缓冲液。
（四）其他
碘酒、酒精棉球、滤纸。
二、操作步骤
（一）血液的采集
1、大鼠与小鼠的采血方法：
① 鼠尾采血：当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾，将尾部浸入45~50℃温水中数分钟，使尾静脉充血，擦干，再用酒精棉球擦试消毒。剪掉尾尖（约0.2~0.3cm），拭去第一滴血。然后用血色素吸管定量吸取尾血，或将尾血直接滴入容器内。采血完毕用干棉球压迫止血。亦可不剪尾，用7~8 号注射针头连上注射器直接刺破尾静脉采血。
② 眼眶静脉丛采血：当需用中等量的血液，而又避免动物死亡时采用本法。左手拇指及食指紧紧握住大鼠或小鼠颈部，压迫颈部两侧使眶后静脉丛充血，但用力要恰当，防止动物窒息死亡。右手持玻璃毛细管从右眼或左眼内眦部以45°角刺入，刺入深度小鼠约2～3mm, 大鼠4～5mm。若遇阻力稍后退调整角度后再刺入，如穿刺适当，血液能自然流入毛细管内。
得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，拔出毛细管，用干棉球压迫止血。
③断头采血：当需用较大量的血液，而又不需继续保存动物生命时采用本法。左手握住动物，右手持剪刀，快速剪掉头颈部，倒立动物让血液滴入容器。需注意防止断毛落入容器中。
2、家兔采血方法：
① 耳缘静脉采血：本法为最常用的取血方法之一，可多次反复取血。将家兔固定于兔箱中，拔掉拟采血耳缘部细毛，用手指轻轻弹耳或电灯照射兔耳，使耳部血管扩张，然后消毒。左手压迫耳根，用针头刺破静脉或以刀片在血管上切一小口，让血液自然流出。也可直接用注射器进针耳缘静脉抽取血液。采血完毕用干棉球压迫止血，如一时不易止血，可用木夹夹住耳壳10~20 分钟。
② 心脏穿刺采血：将家兔仰卧位固定在兔台上或由助手捉持，在左胸第2~4 肋部剪毛，常规消毒。于第3~4 肋胸骨左缘心跳最明显处穿刺，针头刺入心脏后即见血液涌入注射器。采血完毕迅速将针头拔出，这样心肌上的穿刺孔较易闭合，针眼处用酒精棉球压迫止血。体重2 公斤的家兔每隔2~3 周可重复采血10~20ml。
③股动脉采血：将家兔仰卧固定在兔台上，左手拉直动物后肢，右手持注射器，以血管博动为指标，将针头刺入股动脉。若已刺入动脉，即有鲜红色血液流入注射器。抽血完毕迅速拔出针头，用干棉球压迫止血。
3、狗的采血方法：
① 后肢外侧小隐静脉和前肢皮下头静脉采血：本法最常用，且方便。后肢外侧小隐静脉位于后肢胫部下1/3 的外侧浅表的皮下，由前侧走向后上侧，前肢皮下头静脉位于前肢脚爪上方背侧的正前方。抽血前，将狗固定在狗台上或使狗侧卧，由助手固定好。剪去抽血部位的毛，常规消毒。一人用力压迫静脉近心端或用止血带绑紧，使静脉充盈，另一人持注射器进行静脉穿刺。取得所需血量后拔出针头，以干棉球压迫止血。
②耳缘静脉采血：当需少量血液或作血常规检查时，可用狗的耳缘静脉采血法。剪毛后先将狗的耳壳加热，或用二甲苯棉球擦耳壳，然后以刀片切割已扩张的血管，使血液滴入容器。
采血完毕，以干棉球压迫切割口以止血。
4、采集血液的注意点：
① 实验动物一次采血量过多或采血过于频繁，都可影响动物健康，造成贫血甚至死亡，其最大安全采血量见表1。
② 采血方法的选择，主要取决于实验的目的和所需血量的多少，所需血量较少时可刺破组织取毛细血管的血，当需血量较多时可作静脉采血，若需反复多次静脉采血时，应自远心端开始。
③ 若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂，常用的抗凝剂有：
A、草酸钾：常用于供检验用血液样品的抗凝。在试管内加饱和草酸钾溶液2 滴，均匀浸湿管壁后，放入烘箱（80℃）烤干，包好备用。每管能使3~5ml 血液不凝固，供钾、钙含量测定的血样不能用草酸钾抗凝。
B、肝素：取1%肝素溶液0.1ml 于试管内，均匀浸湿试管内壁，放入烘箱（80~100℃）中烤干。每管能使5~10ml 血液不凝固。市售的肝素注射液每ml 含肝素12.500 U，相当于肝素钠125mg。
C、枸橼酸钠：3.8%的枸橼酸钠溶液1 份可使9 份血液不凝固，用于红细胞沉降速率测定。
因其抗凝作用较弱而碱性较强，不适用于供化验用的血液样品。
（二）血清与细胞分离
1、制备血清将全血置于4℃冰箱中保存3－4h，以1500－2000r/min 离心15min。上清液呈淡黄色即为血清，吸出备用；如上清液呈淡红色（甚至红色），表明有溶血，一般应废弃。
2、细胞分离分离血细胞时，采血所有器皿均先行抗凝剂处理。即先将抗凝剂吸入所有器具中，使在器壁上均匀涂布。采血时使抗凝剂溶于血中，并混匀。2000r/min 离心20nim，吸出上清血浆。血浆与红细胞之间白细胞，需要时，把白细胞转入到另外离心管，不需要则废弃。离心管所留的红细胞，加入等体积的生理盐水，轻轻混匀红细胞，再次离心，弃去上清液。如此洗涤3 次，直至上清液为无色透明为此，即获得红细胞。白细胞可依相同洗涤处理。
（三）尿液的收集
1、一次尿收集法：在实验研究中，有时为了某种实验目的，要求每间隔一定的时间收集一次尿液，如每4 小时收集一次，以观察药物的排泄情况。此种情况下，常用以下方法收集尿液。
①逼尿法：本法适用于兔、猫。助手把动物抱住，操作者右手由腹腔向下逐渐用力压迫膀胱，逼出尿液。
②导尿法：本法适用于兔、猫、猴和狗等动物，是较常用的方法之一。动物取仰卧位固定于手术台上，尿道口常规消毒。以左手充分暴露尿道口且固定之，右手持导尿管（尖端涂有消毒凡士林或液体石蜡）顺尿道轻而慢地插入，家兔插入约8~12cm，一旦进入膀胱腔，即见尿液流出。若无尿流出，可将导尿管适当上下左右移动，到尿液流出为止，然后用胶布将导尿管与动物体固定。
③输尿管插管法：本法适用于兔、猫、猴和狗。以兔为例：将兔麻醉后仰卧位固定在手术台上，于耻骨联合上缘沿正中腹白线作一4~6cm 的切口，打开腹腔，在膀胱底两侧找出左右两根输尿管，分离后于两根输尿管下各穿两根线，一根结扎近膀胱端，在结扎线上方向肾脏方
2、连续收集尿液的方法
大鼠和小鼠的留尿法：在小动物的毒理实验中，常常收集24 小时或某特定时间内的尿液。
为此常用代谢笼配上粪尿分离漏斗收集尿液，此装置除支架外均用玻璃或有机玻璃制成，便于清洗。该装置主要包括圆形有机玻璃笼罩，带孔的圆玻璃底盘，供饮水和食料的装置，锥形集尿漏斗和粪尿分离器等。动物置于代谢笼内，粪尿分离漏斗的侧口接一只150~200ml的集尿容器收集尿液。
一般5~6 小时内，平均每只小鼠可收集到0.4~0.5ml 的尿液。如留尿前给予灌胃，每克体重灌液0.02ml，则可增至0.7~0.8ml。未经水负荷的正常大鼠，排尿量约为0.5ml/100g 体重/小时。
猫和兔连续集尿装置的组成部分与大鼠的基本相同。但代谢笼常用铁丝和搪瓷制成。集尿的容器要大一些。
3、收集尿液的注意点
① 尿液收集器必须保证粪尿分开，防止粪便污染尿液。标本容器务须洁净，其容量视动物而定。
② 标本收集后，须在新鲜时进行检验，若需放置时间较久，则须贮放在冰箱或加入适当的防腐剂。
③ 分析尿中金属离子时，代谢笼等应避免用金属材料制成，集尿容器最好用聚乙烯材料的。
④为了满足实验所需尿量，在收集尿液前，可灌喂适量的水及青菜。
（四）实验动物组织匀浆的制备
动物处死后，立即取出所需组织，置于干冰内备用。或置于冰块上，轻轻除去表面的凝血及结蒂组织等附属物，再经冰冷生理盐水洗涤几次，用滤纸吸干水份，称取一定重量的组织备用。如有特殊需要或短期保存，应放入液氮中或冰箱冻结。
将已剥离处理好的脏器定量置于匀浆器中，按设计要求加入一定比例的溶液。以肝组织匀浆为例，称取1 克重的肝组织，在表面皿内剪碎后，以1 : 9（1 份肝组织加9 份0.155M KCl溶液）在匀浆器中稀释，用电动搅拌器以3,000 转/分的转速研磨2~3 分钟。再经3,000 转/分的转速，在4℃中离心10~15 分钟。取上清液即可测定肝组织匀浆的酶活力（GPT 或GOT）。
当制备组织药物萃取的组织匀浆时，基本方法同上，但匀浆的操作不一定在冷冻条件下进行。组织块与适宜比例的无离子水研磨成匀浆后，匀浆不必离心。但有时需水解，使结合的药物变成游离状态，再加入萃取用的有机溶剂，振荡、抽提，使药物或代谢产物萃取入有机溶剂内，从而达到与组织分离的目的。
