(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(43)申请公布日(21)申请号202210980988.7(22)申请日2022.08.16(71)申请人浙江工业大学地址310000浙江省杭州市拱墅区潮王路18号(72)发明人(74)专利代理机构浙江千克知识产权代理有限公司33246专利代理师冷红梅(51)Int.Cl.B01D3/10(2006.01)B01D11/02(2006.01)C12P7/22(2006.01)A23B4/10(2006.01)A23B7/16(2006.01)(54)发明名称一种覆盆子结合酚及提取制备方法与应用(57)摘要本发明属于覆盆子结合酚提取技术领域，具体涉及一种覆盆子结合酚及提取制备方法与应用。通过超高压技术辅助乙醇‑硫酸镁双水相萃取法提取覆盆子结合酚，条件温和、产品活性损失少、无有机试剂污染，同时，萃取体系具有较好的可调性，有效缩短提取时间，覆盆子结合酚的提取率大幅增强。本发明采用开创性的工艺方法，分离速度快、操作简单。利用提取的覆盆子结合酚制备水产品及果蔬制品涂膜保鲜剂，从而有效延长新鲜水产品及果蔬制品的储藏期，显著提升覆盆子结合酚的使用价值和经济价值，有利于在食品工业化生产实践中推广与应用。

权利要求书2页说明书12页附图2页CN1153179431.一种覆盆子结合酚提取制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（S.1）将覆盆子洗净、干燥、粉碎得到覆盆子粉；（S.2）向步骤（S.1）中得到的覆盆子粉进行除杂，得到覆盆子滤渣；（S.3）向步骤（S.2）中得到的覆盆子滤渣中加入复合型酶解液进行酶解，酶解结束后取上清液，得到覆盆子结合酚上清液；.4）将步骤（S.3）中得到的覆盆子结合酚上清液加入到双水相体系中，然后加压萃取，萃取结束后得到含有覆盆子结合酚的溶液，再通过减压蒸馏得到覆盆子结合酚。2.根据权利要求1所述的一种覆盆子结合酚提取制备方法，其特征在于，所述步骤（S.3）中加入的复合型酶解液为纤维素酶和果胶酶的混合液。3.根据权利要求2所述的一种覆盆子结合酚提取制备方法，其特征在于，所述步骤（S.3）中加入的含纤维素酶的酶解液的质量分数为5～30mg/g，含果胶酶的酶解液的质量分数为4～15mg/g，加入的纤维素酶和果胶酶的质量比为1:1～5:1。4.根据权利要求1所述的一种覆盆子结合酚提取制备方法，其特征在于，所述步骤（S.4）中双水相体系中按照重量百分比计包括205.根据权利要求1所述的一种覆盆子结合酚提取制备方法，其特征在于，所述步骤（S.4）中加压萃取反应条件为30030min。

6.根据权利要求1所述的一种覆盆子结合酚提取制备方法，其特征在于，所述步骤（S.2）中除杂步骤如下：（S2.1）在步骤（S.1）中得到的覆盆子粉中依次通过石油醚、甲醇水溶液、丙酮水溶液进行清洗，清洗结束后加入纯水混合均匀，得到覆盆子混合液；（S2.2）向步骤（S2.1）中得到的覆盆子混合液中加入含有果胶酶的酶解液，反应至酶解完全，再加入含有木瓜蛋白酶的酶解液，反应至酶解完全，最后加入含有淀粉葡萄糖苷酶的酶解液，反应至酶解完全，最终得到水解混合液；（S2.3）将步骤（S2.2）中得到的水解混合液真空抽滤、干燥、过筛得到覆盆子滤渣。7.根据权利要求6所述的一种覆盆子结合酚提取制备方法，其特征在于，所述步骤（S.2）中除杂条件如下：加入的覆盆子粉与石油醚的料液比为1:201:50（g/mL）；加入的甲醇水溶液的质量百分比浓度为6090%；加入的丙酮水溶液的质量百分比浓度为5080%；加入的含有果胶酶的酶解液的质量百分比浓度为0.195反应1050min；加入的含有木瓜蛋白酶的酶解液的质量百分比浓度为0.580反应4090min；加入的含有淀粉葡萄糖苷酶的酶解液的质量百分比浓度为0.150min。

8.如权利要求1CN115317943CN115317943一种覆盆子结合酚及提取制备方法与应用技术领域[0001]本发明属于覆盆子结合酚提取技术领域，具体涉及一种覆盆子结合酚及提取制备方法与应用。背景技术[0002].覆盆子中的多酚类物质分为游离酚和结合酚，目前国内外对覆盆子多酚的研究主要集中在覆盆子中的游离酚，对于覆盆子中多酚物质的提取和测定也大多数仅分析了游离酚，而对覆盆子中结合酚类物质的研究鲜有报道。有研究表明，结合酚是人类摄入的主要膳食抗氧化剂，对活性羰基化合物有清除作用，贡献了膳食中大约60%的抗氧化能力。植物中结合酚的功能特性及其在食品加工和储藏过程中的应用也受到了越来越广泛地关注。[0003]我国水产资源丰富，其中大黄鱼的鱼肉中富含营养价值较高的不饱和脂肪酸。由于其脂肪含量较高，导致新鲜鱼肉在冻藏过程中易发生脂肪氧化产生大量的活性羰基化合物，如(E)‑4‑羟基己烯醛（4‑hhe）HHE、4‑羟基壬烯醛（HNE）、丙二醛（MDA）等，经研究证明覆盆子结合酚具有对活性羰基化合物的清除能力。故将提取的覆盆子结合酚对新鲜鱼肉片进行涂抹处理起到抑制羰基化合物生成的作用，从而延长新鲜鱼肉的储藏期，以增加其使用价值和经济价值。

[0004]多酚一般是用有机溶剂提取，但根据所用工艺不同，又细划分为有机溶剂常温提取、热提取、超声波辅助提取、微波提取等。传统的提取方法是用有机溶剂对结合酚进行萃取。该方法操作复杂，提取剂用量大，生产成本较高。同时，使用的试剂大多为具有毒性且刺激性气味较浓烈的甲醇、乙醚、乙酸乙酯等有机试剂，在萃取过程中会降低结合酚的活性。此外，萃取时间较长，提取效率较低，不适合工业化生产。超声波辅助提取法具有提取温度低、提取液易分离纯化等优点，在提取天然活性产物领域已被广泛运用。但超声波频率高，能量大，能产生显著的热效应，容易破坏结合酚的活性。同时，超声波的作用可促使发生某些化学反应，影响提取效果。微波技术在植物色素、中药有效成分、多糖等物质的提取上应用广泛，但在覆盆子多酚的提取中应用较少。[0005]在专利CN201310540732.5中的方案中，提供了一种从覆盆子中提取覆盆子酮的方法。该方法包括以下步骤：覆盆子提取，脱色，浓缩，过柱、浓缩。其中，覆盆子提取是指覆盆子用60%98%的甲醇水溶液减压加热回流提取或超声波提取。该提取工艺过程无添加毒性试剂，只用到乙醇，产品质量安全，同时，在提取方式上采用减压热回流提取或者超声波提取法，可提高产品收率。

采用大孔吸附树脂增强对覆盆子酮的选择性，提高产品纯度。但利用超声波辅助提取法重复性差，实验过程参数不易控制，致使提取效率降低。此外，超声波辅助提取过程极容易产生空化效应，致使大量小气泡在极短的时间内形成并破灭，产生的极大冲击力，继而损坏设备，对生产安全带来隐患。另外，该方案中采用大孔树脂进行纯化，所需树脂量较多，成本较高。同时，纯化过程需经过两次洗脱，洗脱速度人工难以控制，耗时长，效率偏低。CN115317943发明内容[0006]本发明是为了克服现有技术中利用有机溶剂从覆盆子中提取结合酚的制备工艺 过程复杂，萃取时间长，成本高，提取效率低的缺陷，提供了一种覆盆子结合酚及提取制备 方法，并将其应用于水产品及果蔬制品涂膜保鲜剂的制备中。 [0007] 为实现上述发明目的，本发明通过以下技术方案实现： 一种覆盆子结合酚提取制备方法，包括以下步骤： （S.1）将覆盆子洗净、干燥、粉碎得到覆盆子粉； （S.2）向步骤（S.1）中得到的覆盆子粉进行除杂，得到覆盆子滤渣； （S.3）向步骤（S.2）中得到的覆盆子滤渣中加入复合型酶解液进行酶解，酶解结束 后取上清液，得到覆盆子结合酚上清液； （S.4）将步骤（S.3）中得到的覆盆子结合酚上清液加入到双水相体系中，然后加压 萃取，萃取结束后得到含有覆盆子结合酚的溶液，再通过减压蒸馏得到覆盆子结合酚。

[0008] 双水相萃取法，是一种利用物质在互不相溶的双水相间分配系数的差异来进行分 离的方法。双水相是指某些高聚物之间，或高聚物与无机盐之间在水中以适当浓度溶解后 形成的互不相溶的两相。双水相萃取与传统的有机相‑水相溶剂萃取体系相比，两相的溶剂 都是水，避免了有毒、易燃的有机溶剂残留问题。同时，常温常压操作，不会引起生物活性物 质失活或变性。此外，两相界面张力小，萃取时两相能够高度分散，传质速度快。另外，溶剂 对目标组分选择性强，分离过程简单，易于工业放大和连续操作而产物收率并不降低。因 此，被广泛用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取。 [0009] 超高压技术是目前受各国科研者青睐并被广泛研究的一项食品高新技术。超高压 提取法一般用于中药有效成分的提取，近年来逐渐被用于天然产物中活性物质的提取，其 作用过程分两步，一是材料浸润和溶解溶质的过程；二是溶质的扩散过程。材料浸润和溶解 溶质的过程就是溶剂通过材料颗粒表面进入细胞内，使细胞内部充满溶剂，从而使其中的 可溶物逐步扩散溶解于溶剂中，形成溶液，得到所需的粗提液。该法因其提取时间短、溶剂 消耗少、提取效率高、节能、提取温度低、工艺操作简单安全等优点受广大研究者青睐。

[0010] 活性羰基化合物（RCS）是细胞内一类包含活性羰基结构的小分子化合物。研究表 明，活性羰基化合物（RCS）与多种慢性疾病相关。活性羰基化合物（RCS）是活性氧（ROS）的下 游产物，主要由脂质过氧化分解产生。过量的活性羰基化合物（RCS）会破坏细胞内的氧化还 原平衡，导致细胞死亡。活性羰基化合物（RCS）反应活性非常强，能与蛋白质、核酸反应生成 共价加合物，如(E)‑4‑羟基己烯醛（4‑hhe）HHE、4‑羟基壬烯醛（HNE）、丙二醛（MDA）等。活性 羰基化合物（RCS）同时具有两个吸电子基团，不饱和双键可与蛋白质肽链中的亲核基团发 生加成反应。这些加合物的生成通常会抑制蛋白酶体活性，导致不可降解产物的细胞积累， 引起细胞毒性并导致病理。机体内过高的羰基化合物还可引发严重的细胞毒性、遗传毒性、 神经毒性、致突变或致癌变作用等。因此，迫切需要一种天然的，具有清除活性羰基化合物 能力的覆盆子结合酚清除剂。 [0011] 本发明创新性地利用超高压技术辅助双水相体系的工艺方法萃取覆盆子滤渣经 酶水解后得到的结合酚。本发明采用乙醇‑硫酸镁双水相体系萃取法，体系的相间张力大大 低于有机溶剂与水的相间张力，分离条件温和，能保持绝大部分生物分子的活性。

整个过程 可在常温常压下进行，操作条件温和。体系内传质和平衡速度快，回收率高，可达到90%以 CN115317943 上，比起其他的一些分离过程，其能耗小。离子液体的蒸汽压几乎为零，不会出现像有机溶剂那样因挥发而引起环境问题。无有机试剂污染，萃取体系具有较好的可调性。与传统的高 聚物双水相相比，可更好的控制乳化现象。此外，超高压技术只影响高分子立体结构的氢 键、离子键和疏水键等非共价键酚类化合物，而共价键的酚类化合物却不发生改变。能很好 的保留结合酚的活性，同时有效减少提取时间。另外，超高压技术加快了传质过程，压力越 高，越多的提取溶剂能够进入细胞内部。随着提取溶剂进入细胞，更多的细胞内活性物质渗 透出细胞外，从而大幅度的提高结合酚的提取率。 [0012] 作为优选，所述步骤（S.3）中加入的复合型酶解液为纤维素酶和果胶酶的混合液。