一种宽体金线蛭提取物缓释微丸的制备方法

【技术领域】

[0001] 本发明涉及含肽的医药配制品，具体涉及来源于水蛭的提取物制成药物制剂的方 法。

【背景技术】

[0002] 宽体金线蛭是水蛭的一种，水蛭是我国长期应用的传统中药之一，最早记载于 《神农本草经》，功能破血逐瘀。水蛭品种繁多，全世界约有400-500种，我国已发现89种 [1]。《中国药典》收载水蛭为水蛭科动物蚂蟥（Whitmania pigra Whitman)、水蛭（Hirudo nipponica Whitman)或柳叶蚂Φ黄（Whitmania acranulata Whitman)的干燥体。其中宽体 金线蛭又称蚂蟥，是目前临床上使用最多的水蛭品种，占总量的95%。

[0003] 水蛭的临床应用方式一直以来都是口服给药为主，可以单方或复方使用，目前市 售的含有水蛭的制剂如通心络胶囊、活血通脉胶囊、逐瘀通脉胶囊、步长脑心通，多是直接 将水蛭原药材粉碎或煎煮后后制备成各种剂型，由于水蛭中的有效成份多为蛋白质、多肽 类成分，难以避免水蛭有效成分被直接破坏或被胃肠道消化酶等降解。不能有效的保障其 发挥最佳的疗效。

[0004] 国内对于水蛭（科）的研究较多，主要涉及临床应用，抗凝作用，提取、纯化方法， 活性物质组成等方面，多项研究结果证明宽体金线蛭的活性成分与其它水蛭不同，其基本 不含水蛭素，含有相对稳定的多肽类抗凝物；刘文伟等[3]比较了蚂蟥和日本医蛭经不同 提取工艺处理后的抗凝血酶活性，结果发现无论采用何种提取工艺，蚂蟥提取液基本无抗 凝血酶活性；而日本医蛭提取液可抑制凝血酶，煎煮或炮制后活性明显降低。欧兴长等[4] 比较了不同提取方法对菲牛蛭、日本医蛭、天然蚂蟥和人工饲养蚂蟥的抗凝影响，也证明蚂 蟥提取液几乎无抑制凝血酶活性，而日本医蛭和菲牛蛭活性较高，但受热后活性急剧下降。 覃树先[5]比较了冷提、温浸和炮制三种提取工艺对日本医蛭和蚂蟥干体抗凝血酶作用的 影响，所得数据与欧兴长等人的结果一致。吴志军等[6]采用抗凝血酶、抗胰蛋白酶和抗糜 蛋白酶3种检测方法，测定蚂蟥、日本医蛭、欧洲医蛭、菲牛蛭样品的生物活性。结果显示： 菲牛蛭的抗凝血酶活性相当于日本医蛭，而蚂蟥几乎无抗凝血酶活性；我们研究的结果页 显示：宽体金线蛭高中低剂量组均能抑制由角叉菜胶诱导的小鼠尾静脉血栓形成、抑制由 胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠偏瘫和死亡、能延长小鼠的凝血时间、能延长小鼠的出血 时间。而提取物经胃蛋白酶和胰蛋白酶水解后，以上活性均消失或明显减弱。

[0005] 已有的研究结果均表明：菲牛蛭及日本医蛭都含有凝血酶，通过凝血酶发挥作用， 但是凝血酶很不稳定，非常容易降解，无论采用何种制剂手段，都难以制成可口服的稳定制 剂；而宽体金线蛭的活性成分不是凝血酶，其成分虽然是蛋白或多肽（已实验证明），但是 相对稳定，在提取、制剂过程中可保持基本不会破坏，但是如果采用目前最常规的口服给药 方式，存在易被破坏及吸收困难以等弊端，结肠部位的蛋白水解酶浓度远低于其它肠段，且 药物在此处滞留时间长，结肠壁对大分子穿透的阻力小，有利于药物的吸收，现在很多研究 都将多肽的口服制剂制成结肠给药制剂，结合吸收促进剂等附加剂的使用可适当提高这类 药物的稳定性及生物利用度，但是由于结肠没有绒毛及多肽的肠穿透力较弱导致其吸收仍 然较慢。

[0006] 对于水蛭的口服制剂有些研究报道及专利被公开或授权；如汤沛需等人做了重组 水蛙素口服乳糜微粒的研究；专利CN101584859A公开了一种水蛙素微球制剂及其制备方 法，用于口服给药；专利CN1393266A公开了一种水蛭素缓（控）释制剂的制备方法，目标 是维持给药后水蛭素有效血药浓度，克服其半衰期短的缺点；专利CN1428173A授权了一 种重组水蛭素肠溶缓释制剂的方法，为加入稳定保护剂和胃肠蛋自酶抑制剂的一种肠溶缓 释口服制剂；专利CN01810561A公开了一种水蛭素的聚离子胶束组合物的制备方法；专利 CN102362874B授权了一种水蛭结肠靶向口服制剂及其制备方法。以上的文献及专利主要都 是天然或重组水蛭素设计的，以解决水蛭素口服吸收少，利用度低的问题，但是水蛭素非常 不稳定，很难解决其制剂过程、保存及口服后的稳定性，即使设计了结肠给药，也忽视了结 肠吸收较慢、溶出的药物长时间在结肠中仍会被酶及微生物降解的问题，不能很好地解决 水蛭素口服吸收的问题，且以上专利中选用的PH敏感型结肠释药系统，由于结肠的pH与小 肠差异较小，也存在提前或进入结肠长时间不能溶解而释药的问题；以上专利申请中，有些 提及可用水蛭提取物，但是含水蛭素的医蛭类与不含水蛭素的宽体金线蛭活性成分是完全 不同的。

【发明内容】

[0007] 本发明所要解决的技术问题是公开一种宽体金线蛭提取物缓释微丸的制备方法， 该方法所得到的缓释微丸具有生物利用度高的优点。

[0008] -种宽体金线蛭提取物缓释微丸的制备方法，该方法包括以下步骤：

[0009] a)取宽体金线蛭提取物，分别加入宽体金线蛭提取物重量2-10倍的骨架材料、 0. 1-1倍的致孔剂、0. 05-0. 5倍的粘合剂和0. 01-0. 1倍的口服吸收促进剂，混合均匀后用 蒸馏水润湿制备软材，再经挤出、滚圆、干燥和过24-40目筛的工艺，即得载药微丸；其中， 所述的骨架材料为微晶纤维素和淀粉中一种，或二者的混合物；所述的致孔剂为乳糖、聚乙 二醇或氯化钠；所述的粘合剂为羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；所述的口服吸收促 进剂为SANC或十_烷基硫酸纳；

[0010] b)在包衣锅或流化床中，分别加入所述载药微丸重量0. 1-0. 5倍的溶胀材料和 0. 01-0. 1倍的粘合剂，用蒸馏水溶解并混匀，然后，往包衣锅或流化床中加入所述的载药微 丸，在25°C -45°c下喷雾包裹溶胀衣膜；其中，所述的溶胀材料为交联聚乙烯吡咯烷酮或低 取代羟丙级纤维素，所述的包衣粘合剂为聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素；

[0011] C)按步骤b)所得包衣溶胀衣膜的载药微丸的重量以控释材料中的固含量计取 0. 033-0. 5倍的控释材料，置于包衣锅或流化床中，加入控释材料重量的0. 02-0. 2倍的 增塑剂和控释材料重量的〇. 01-0. 5倍的抗粘剂，用蒸馏水溶解，混合均匀。然后，往包衣 锅或流化床中加入步骤b)所得包裹溶胀衣膜的载药微丸，在25°C -45°C下进行喷雾包 裹控释衣膜；其中，所述的控释材料是EudragitsRS30D、Eudragit ilRLSOIK EudragitiNE 30D、Eudragit"RS100、Eu.dr%g:lt?RLl():〇 或乙基纤维素中的一种，或者是Eudragit?RS30D: 和Eudragit*RL30D的混合物，或者是EudragitlRSlOO和EudragitltRLlOO丨的混合物；当 所述的控释材料是 Eudragit*RS30D 和 Eudragit?RL30D 的混合物时，Eudragit*RS30D 与Eud:ragitll!RL30D的重量比=5:1-50:1 ;当所述的控释材料是Eudragit'*RS100和 丑公._&目11*既1〇〇的混合物时，丑^『&目11$3_1〇〇与￡1}(1顶#:1 _^既10:_〇的重量比=5:1-5〇:1;所 述的增塑剂是聚乙二醇、柠檬酸三乙酯或癸二酸二丁酯；所述的抗粘剂是单硬脂酸甘油酯 或滑石粉；

[0012] d)按步骤c)所得包衣溶胀衣膜的载药微丸的重量以肠溶材料中的固含量计取 0. 033-0. 5倍的肠溶释材料，置于包衣锅或流化床中，加入肠溶材料重量0. 02-0. 2倍的增 塑剂和0. 01-0. 5倍的抗粘剂，用蒸馏水溶解，混合均匀。然后，往包衣锅或流化床中加入步 骤c)所得包衣控释衣膜的载药微丸，在25°C_45°C下进行喷雾包裹肠溶衣膜；其中，所述的 肠溶材料为Eud ragitaL3QD-5:5、EudragitllOO-55、邻苯二甲酸醋酸纤维素或羟丙基甲基 纤维素酞酸酯；所述的增塑剂为聚乙二醇或柠檬酸三乙酯；所述的抗粘剂为单硬脂酸甘油 酯或滑石粉。

[0013] 上述方法中所述的宽体金线蛭提取物是宽体金线蛭的水提物，该水提物是按常规 的方法水提或水提醇沉得到。

[0014] 根据宽体金线蛭活性物为蛋白或多肽，其扩散速度较慢的特点，为了使本方法所 得到的缓释微丸中宽体金线蛭提取物在水或人工肠液中约6小时释放完全，本发明所述方 法的步骤a)将所述的载药微丸制成骨架微丸，同时，加入致孔剂调节微丸中蛋白及多肽释 放速度，添加口服吸收促进剂促进微丸中的药物吸收。

[0015] 由于本发明所述方法的步骤b)在载药微丸包裹溶胀衣膜，因此药物进入体内后， 消化道液透过控释层进入微丸即被该溶胀材料吸收，不会进一步进入丸芯溶解药物，直至 溶胀层吸收足够水分，体积胀至使控释层破裂，大量水分进入，丸中药物才开始正常释放。

[0016] 本发明所述方法的步骤c)所述控释衣膜的作用是控制水分进入微丸的速度，同 时阻止微丸中的药物提前释放，在控释层未被溶胀层胀破前，微丸中药物基本不释放出。所 述控释衣膜的另一作用是在肠溶层溶解后，大约4小时被溶胀层涨破，药物开始释放，此时 间设计是基于人体小肠的转运时间。

[0017] 本发明所述方法的步骤d)所述肠溶衣膜的作用是使微丸口服后，在胃中阻止胃 液进入微丸，委婉到达小肠后溶解，目的是克服胃排空时间个体差异较大带来的