本发明属于生物医药，具体而言，涉及一种植物来源的糖蛋白，尤其涉及一种富硒山药糖蛋白作为免疫调节药物的应用。
背景技术：
1、机体的免疫系统是一个组成和功能都十分复杂的系统，在细胞生长分化、炎症反应以及肿瘤发生发展等多种生理过程中发挥着复杂重要的作用。因此，越来越多的研究聚焦于促进免疫的天然产品。最近的研究表明，植物糖蛋白在抗衰老、抗凝血抗氧化和免疫调节方面具有显著的作用。
2、山药又称淮山、大薯、山薯、薯蓣，原产亚热带地区。山药为多年生缠绕藤本植物，茎蔓生细长右旋，茎蔓长达3m以上；叶片心脏形或箭头形，叶对生或3叶轮生，长1m以上；叶腋间常生1～3个珠芽，称为气生块茎，又称零余子或山药蛋，可繁殖和食用；地下肉质块茎分为3类，即棍棒状、掌状和块状，表皮粗糙呈淡黄褐色或黑褐色，块茎表面生长许多细须根，在春季块茎上长出不定芽，块茎肉质白色或淡紫色。山药在我国南北各地均有栽培，以地下肉质块茎食用。富硒山药营养丰富，菜药兼用，富含淀粉及蛋白质，同时含有维生素、葡萄糖、氨基酸、胆汁碱及尿囊素等，具有健脾益胃、帮助消化、滋肾益精、益肺止咳、抗肝昏迷、降低血糖、益寿延年之功能，生产效益高，深受生产者和消费者青睐。山药糖蛋白的一些功能特性对人体具有极大利用价值，如免疫调节、抑制肿瘤、降低血糖等生物活性。硒是一种天然抗氧化剂，能有效清除人体代谢过程中所产生的氧自由基。鉴于此，从富硒山药中提取富硒山药糖蛋白(seglp)，这不仅对提高人们健康水平有着十分重要的意义，而且能促进山药规模化生产及深加工进而带来巨大的社会效益和经济效益，对发展我国拥有自主知识产权的现代健康食品产业具有重要学术价值和经济意义。因此，从富硒山药中提取富硒山药糖蛋白，开发以其为主要成分的营养健康保健品，对于山药的深加工及提高人们的健康水平都有十分重要的意义。
3、cn109081864a公开了一种山药糖蛋白的提取纯化方法，该方法首先称取干燥山药粉加入三蒸水中，在恒温热水中浸提；浸提结束后离心取上清液，将上清液进行减压浓缩；减压浓缩后加入无水乙醇析出沉淀，将沉淀物干燥得到糖蛋白粗提物；对糖蛋白粗提物进行两次柱层析纯化除杂，得到纯化糖蛋白。虽然该方法通过水提醇沉的方法获得了一种山药糖蛋白，但该糖蛋白的免疫调节活性较低，不足以开发成免疫调节类药物。
技术实现思路
1、鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种能有效提高机体免疫力的全新富硒糖蛋白，从而作为活性成分开发成免疫调节药物。
2、为了实现上述技术目的，本发明人以河南焦作地区种植的富硒山药为原料，通过大量试验研究并不断改进提取工艺，最终获得了一种全新的富硒糖蛋白，且意外地发现该富硒糖蛋白具有极其优异的免疫调节活性。
3、具体地，本发明的目的是通过如下技术方案实现的：一种富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用。所述的免疫调节活性体现为提高免疫器官指数，改善胸腺免疫状态。所述的抗氧化活性体现为mda水平降低，sod、gsh活性提高，通过nrf2/oh调节机体，氧化损伤得到改善。
4、所述的富硒山药糖蛋白按照如下步骤制备而得：
5、(1)取河南焦作地区种植的富硒山药为原料，经过去皮、粉碎后加入蒸馏水提取，提取温度为45～65℃，提取时间为3～5h，然后进行第一次离心取上清液，将所述上清液进行减压浓缩，至原体积的1/2～1/3，在浓缩液中加入乙醇，使乙醇的体积浓度为75％，沉淀后分离沉淀物，加入蒸馏水复溶，然后加入体积比1:4的正丁醇-氯仿溶液，反复震荡后进行第二次离心，取上层样品液，加入乙醇，使乙醇的体积浓度为75％，沉淀后分离沉淀物，将沉淀物冷冻干燥，得富硒山药糖蛋白粗提物；
6、(2)将步骤(1)得到的富硒山药糖蛋白粗提物用蒸馏水配制成样液，采用deae-52纤维素柱进行层析，依次经过蒸馏水、0.05m、0.1m、0.5m的氯化钠溶液进行洗脱，收集洗脱液，用紫外分光光度在490nm处通过苯酚-浓硫酸法检测糖的吸收峰，在280nm处检测蛋白的吸收峰，收集合并糖和蛋白的吸收峰相互重叠的部分洗脱液，然后浓缩，干燥得富硒山药糖蛋白组分a；
7、(3)将步骤(2)得到的富硒山药糖蛋白组分a溶于蒸馏水中，采用sephadexg-75凝胶柱进行层析，用蒸馏水作为洗脱剂，收集洗脱液，紫外可见分光光度计上检测280nm处的蛋白质吸收峰，用紫外分光光度在490nm处通过苯酚-浓硫酸法检测糖的吸收峰，在280nm处检测蛋白的吸收峰，收集合并糖和蛋白的吸收峰相互重叠的部分洗脱液，然后浓缩，加入乙醇，使乙醇的体积浓度为75％，沉淀后分离沉淀物，干燥，得到富硒山药糖蛋白组分b。
8、进一步优选地，步骤(1)中将富硒山药去皮干燥之后进行粉碎，粉碎之后过筛的目数为200目。
9、进一步优选地，步骤(1)中将所述原料加入蒸馏水提取时的料液比为1：(10～30)。再进一步优选地，步骤(1)中将所述原料加入蒸馏水提取时富硒山药粉和水的重量体积比为1：25(g/ml)。
10、进一步优选地，步骤(1)中第一次离心的速度为3000r/min，离心时间为15min。
11、进一步优选地，步骤(1)中第二次离心的速度为6000r/min，离心时间为15min。
12、进一步优选地，步骤(1)中震荡的次数为3次，每次震荡的时间为30分钟。
13、进一步优选地，步骤(2)和步骤(3)中采用真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的温度为-80～-70℃。
14、进一步优选地，步骤(2)和步骤(3)中洗脱液的用量可根据洗脱液的产物检测情况进行调整。
15、进一步优选地，步骤(3)中所述富硒山药糖蛋白组分b的分子量约为30kda，总硒含量高于1.42μg/g。
16、进一步优选地，步骤(3)中所述富硒山药糖蛋白组分b中有机硒占总硒含量的98％以上。
17、进一步优选地，步骤(3)中所述富硒山药糖蛋白组分b的蛋白质含量为70～72％。
18、进一步优选地，步骤(3)中所述富硒山药糖蛋白组分b的糖含量为28～29.8％。
19、本发明提供了一种免疫调节药物，其包含所述的富硒糖蛋白。
20、与现有技术相比，本发明采用河南焦作地区种植的富硒山药原料、配合改进的提取工艺，以及后续的柱层析洗脱机制的联合控制，可以获得全新结构的富硒糖蛋白新物质，且制得的新物质具备优异的免疫条件功能，其优点和进步性具体体现在如下方面：
21、(1)本发明通过采用水提醇沉提取富硒山药糖蛋白，不仅不会破坏富硒山药中的营养成分，而且富硒山药糖蛋白的提取得率较高，总硒含量高，以有机硒为主；另外该提取方法简单、环保、高效、成本低，且易于大规模工业化生产。
22、(2)进一步地，本发明提取的富硒山药糖蛋白与普通山药糖蛋白相比，显著增强了免疫和抗氧化活性，可以将其添加到具有增强免疫调节、抗氧化和补硒功能的药品中，不仅更有利于吸收，而且产品稳定性好，可广泛的应用于生物医药行业。
23、(3)本发明会促进山药规模化生产及深加工，进而带来巨大的社会效益和经济效益，提升了其药食两用价值，为制备具有增强免疫调节和抗氧化活性的新型富硒山药糖蛋白提供了新途径，对发展我国拥有自主知识产权的现代健康食品产业具有重要学术价值和经济意义。
技术特征：
1.一种富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用，所述的富硒山药糖蛋白按照如下步骤制备而得：
2.根据权利要求1所述富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用，其特征在于，步骤(1)中将所述原料加入蒸馏水提取时的料液比为1：(10～30)。
3.根据权利要求1所述富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用，其特征在于，步骤(1)中第一次离心的速度为3000r/min，离心时间为15min。
4.根据权利要求1所述富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用，其特征在于，步骤(1)中第二次离心的速度为6000r/min，离心时间为15min。
5.根据权利要求1所述富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用，其特征在于，步骤(1)中震荡的次数为3次，每次震荡的时间为30分钟。
6.根据权利要求1所述富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)中采用真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的温度为-80～-70℃。
7.根据权利要求1所述富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用，其特征在于，步骤(3)中所述富硒山药糖蛋白组分b的总硒含量高于1.42μg/g。
8.根据权利要求7所述富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用，其特征在于，步骤(3)中所述富硒山药糖蛋白组分b中有机硒占总硒含量的98％以上。
9.根据权利要求8所述富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用，其特征在于，步骤(3)中所述富硒山药糖蛋白组分b的蛋白质含量为70～72％。
10.根据权利要求9所述富硒山药糖蛋白在制备具有免疫调节及抗氧化活性的药物中的应用，其特征在于，步骤(3)中所述富硒山药糖蛋白组分b的糖含量为28～29.8％。
技术总结
本发明公开了一种富硒山药糖蛋白作为免疫调节药物的应用，属于生物医药技术领域，所述的富硒山药糖蛋白是采用河南焦作地区种植的富硒山药原料、配合改进的提取工艺，以及后续的柱层析洗脱机制的联合控制，最终获得的一种全新结构的新物质。本发明提取的富硒山药糖蛋白与普通山药糖蛋白相比，显著增强了免疫和抗氧化活性，可以将其添加到具有增强免疫调节、抗氧化和补硒功能的药品中，不仅更有利于吸收，而且产品稳定性好，可广泛的应用于生物医药行业。
技术研发人员：李维凤,明松,王斯琦,牛晓峰,余瑾瑾,冯琦,张静,孙雪娜
受保护的技术使用者：西安交通大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15
