(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(43)申请公布日(21)申请号202211107131.0(22)申请日2022.09.09(71)申请人上海应用技术大学地址201418上海市奉贤区海泉路100号(72)发明人孙小玲邓港董凡(74)专利代理机构上海科盛知识产权代理有限公司31225专利代理师(51)Int.Cl.C08B37/00(2006.01)(54)发明名称一种柘树叶多糖提取工艺(57)摘要本发明涉及一种柘树叶多糖提取工艺，该工艺包括以下步骤：S1：采集柘树叶，经清洗、干燥、粉碎、过筛后，形成柘树叶粉末备用；S2：采用超声波辅助水浴提取柘树叶中的多糖。通过单因素以及正交试验设计得出超声波辅助水浴提取柘树叶中多糖的最佳方案，能够高效的提取柘树叶中的多糖。与现有技术相比，本发明具有操作简便，提取效率高，成本低廉等优点。权利要求书1页说明书5页附图4页CN1154907761.一种柘树叶多糖提取工艺，其特征在于，该工艺包括以下步骤：S1：采集柘树叶，经清洗、干燥、粉碎、过筛后，形成柘树叶粉末备用；S2：采用超声波辅助水浴提取柘树叶中的多糖。2.根据权利要求1所述的一种柘树叶多糖提取工艺，其特征在于，步骤S1具体包括以下过程：原材料的处理：将采集的柘树叶清洗干净并冷冻干燥；破壁、过筛处理：将干燥的柘树叶放入破壁机中粉碎，过筛后，筛出柘树叶粉末，密封保存于干燥箱中。
3.根据权利要求1所述的一种柘树叶多糖提取工艺，其特征在于，步骤S2中，采用苯酚‑硫酸法测定提取液中多糖含量，再根据葡萄糖标准曲线计算出多糖含量，从而得出多糖得率，其中多糖得率计算公式如下：C：根据标准曲线计算出稀释后的多糖样品浓度mg/mL；V：提取液体积mL；K：稀释倍数；m：样品质量g。4.根据权利要求1所述的一种柘树叶多糖提取工艺，其特征在于，步骤S2中，料液比为1:(10‑40)g/mL。5.根据权利要求4所述的一种柘树叶多糖提取工艺，其特征在于，步骤S2中，料液比为1:40g/mL。6.根据权利要求1所述的一种柘树叶多糖提取工艺，其特征在于，步骤S2中，超声的温度为50‑80。7.根据权利要求6所述的一种柘树叶多糖提取工艺，其特征在于，步骤S2中，超声的温度为70。8.根据权利要求1所述的一种柘树叶多糖提取工艺，其特征在于，步骤S2中，超声的时间为30‑60min。9.根据权利要求8所述的一种柘树叶多糖提取工艺，其特征在于，步骤S2中，超声的时间为60min。10.根据权利要求2所述的一种柘树叶多糖提取工艺，其特征在于，过筛时，选用100目CN115490776一种柘树叶多糖提取工艺技术领域[0001]本发明涉及天然产物有效成分的提取技术领域，具体涉及一种柘树叶多糖提取工背景技术[0002]柘树是桑科柘属植物，又名柘桑、刺桑等，生长于我国华北至华东、西南、西北东部的广大区域，柘树喜阳、耐寒、耐干旱贫瘠，在荒山荒地上亦能生长，是一种特色乡土植物。
在韩国，柘树在过去的几十年中已成为最普遍的民间抗癌药物之一；柘木可用来制造家具，柘树皮可用于造纸，柘树根提取物具有显著的抗肿瘤活性，柘果可制成饮料、保健品等。[0003]柘叶是桑科柘树植物柘树的叶子，含有多种营养物质。有研究表明，柘树叶提取物(CT)是一种新的植物性益生元来源，益生菌加氏乳杆菌和发酵乳中的新型益生元柘树叶提取物的合生元组合，具有体外免疫调节作用和抗氧化活性。多糖作为一种天然产物，除了可为人体生长提供能量外，还具有抗肿瘤、降血糖血脂等良好的生物活性。[0004]当前有关柘树叶多糖的报道甚少，且存在提取工艺不娴熟，工艺参数不完善等缺陷，因此，提出一组较优的提取工艺参数和提取方法尤为重要。发明内容[0005]本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种操作简便，提取效率高，成本低廉的柘树叶多糖提取工艺。[0006]本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：[0007]为了克服柘树叶多糖提取效率较低的问题，发明人尝试探索试验，提出一种基于正交试验优化柘树叶多糖提取工艺参数的方法，该方法以柘树叶为原材料，以提高多糖得率为目的，采取超声波辅助水浴法提取，通过单因素与正交设计实验分析得出最佳提取工艺参数，为柘树叶多糖的提取提供技术支持，为柘树资源的综合利用以及提高附加值提供详实的理论依据，具体方案如下：[0008]一种柘树叶多糖提取工艺，该工艺包括以下步骤：[0009]S1：采集柘树叶，经清洗、干燥、粉碎、过筛后，形成柘树叶粉末备用；[0010]S2：采用超声波辅助水浴提取柘树叶中的多糖。
[0011]进一步地，步骤S1具体包括以下过程：[0012]原材料的处理：将采集的柘树叶清洗干净并冷冻干燥；[0013]破壁、过筛处理：将干燥的柘树叶放入破壁机中粉碎，过筛后，筛出柘树叶粉末，密封保存于干燥箱中。[0014]进一步地，步骤S2中，采用苯酚‑硫酸法测定提取液中多糖含量，再根据葡萄糖标准曲线计算出多糖含量，从而得出多糖得率，其中多糖得率计算公式如下：[0015][0016]CN115490776[0017]C：根据标准曲线计算出稀释后的多糖样品浓度mg/mL；[0018]V：提取液体积mL；[0019]K：稀释倍数；[0020]m：样品质量g。[0021]进一步地，步骤S2中，料液比为1:(10‑40)g/mL。[0022]进一步地，步骤S2中，料液比为1:40g/mL。[0023]进一步地，步骤S2中，超声的温度为50‑80。[0024]进一步地，步骤S2中，超声的温度为70。[0025]进一步地，步骤S2中，超声的时间为30‑60min。[0026]进一步地，步骤S2中，超声的时间为60min。[0027]进一步地，过筛时，选用100目筛。[0028]与现有技术相比，本发明具有以下优点：[0029](1)本发明提供的一种基于正交试验优化柘树叶多糖提取工艺参数的方法，综合考虑了料液比、超声温度和超声时间对柘树叶多糖提取得率的影响，并通过单因素与正交实验相结合分析得出提取最佳工艺参数，能够简单、高效的提取柘树叶中的多糖；[0030](2)本发明具有实验操作简单，提取过程中不使用有机试剂，工艺环保无污染，安附图说明[0031]图1为技术方案流程图；[0032]图2为绘制的葡萄糖标准曲线；[0033]图3为葡糖糖溶液的全波长扫描图；[0034]图4为柘树叶多糖溶液的全波长扫描图；[0035]图5为不同料液比对多糖得率影响的折线图；[0036]图6为不同超声温度对多糖得率影响的折线图；[0037]图7为不同超声时间对多糖得率影响的折线图；[0038]图8为柘树叶多糖提取条件正交试验因素及水平设计图；[0039]图9为柘树叶多糖提取条件正交试验设计与结果分析图；[0040]图10为柘树叶多糖提取最佳的工艺参数实验验证结果图。
具体实施方式 [0041] 下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。本实施例在以本发明技术方 案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不 限于下述的实施例。 [0042] 一种基于正交试验优化柘树叶多糖提取工艺参数的方法，包括以下步骤： [0043] S1：采集柘树叶，清洗，干燥，粉碎，过筛，柘树叶粉末备用，具体包括以下过程： [0044] (1)原材料的处理：将采集的柘树叶清洗干净并冷冻干燥； [0045] (2)破壁、过筛处理：将步骤(1)所干燥的柘树叶放入破壁机中粉碎，过100筛，筛出 柘树叶粉末，密封保存于干燥箱中。 CN115490776 [0046]S2：采用超声波辅助水浴提取柘树叶中的多糖，测定提取液中的多糖含量；其中， 提取方法为超声波辅助水浴提取柘树叶多糖，并采用苯酚‑硫酸法测定提取液中多糖含量， 再根据葡萄糖标准曲线计算出多糖含量，从而得出多糖得率，其中多糖得率计算公式如下： [0047] [0048] [0049]C：根据标准曲线计算出稀释后的多糖样品浓度mg/mL； [0050] V：提取液体积mL； [0051] K：稀释倍数； [0052] m：样品质量g。
[0053] S3：选择超声温度、超声时间和料液比进行单因素试验；进行单因素试验时，分析 各因素对多糖得率的影响，选取料液比、超声温度和超声时间依次进行单因素试验，其中料 液比为1:10、1:20、1:30、1:40g/mL；超声温度为50、60、70、80；超声时间为30、40、50、 60min。进行三因素三水平的正交试验，根据S3中的实验数据选择三个因素的具体数值进行 实验。 [0054] S4：在单因素试验的基础上，选取影响最大的因素水平，以超声温度70、超声时 间60min、料液比1:40为自变量，以多糖得率为响应值进行正交试验。 [0055] S5：对正交试验结果进行分析，取多糖得率为最大值，对柘树叶多糖的提取工艺进 行优化，得到最佳提取工艺参数。选取最佳工艺参数时，在选取的三个因素范围内，多糖得 率最大，根据SPSSS软件分析得出柘树叶多糖提取最佳工艺参数。 [0056] S6：对S5中得到的提取工艺参数再进行柘树叶多糖提取工艺参数的确定及验证试 验。根据S5中分析得出的最佳工艺参数进行5次平行实验，再根据实验结果来验证S5中最佳 工艺参数的准确性。 [0057] 实施例1 [0058] 柘树叶多糖的提取，具体包括以下过程： [0059] (1)采集柘树叶； [0060] (2)清洗除杂，冷冻干燥； [0061] (3)将干燥的柘树叶置于破壁机中粉碎，过100目筛，获得柘树叶粉末，收藏于干燥 箱中备用； [0062] (4)称取0.5g柘树叶粉末，向该柘树叶粉末中加水后置于超声波中浸提。
[0063] 实施例2 [0064] 葡萄糖溶液、柘树叶多糖溶液的全波长扫描，标准曲线的制作，具体包括以下过 [0065](1)取10mg的干燥的葡萄糖置于100mL容量瓶中，加水溶解，定容至100mL，配成 0.1mg/mL的葡萄糖溶液；取最佳工艺下提取的柘树叶多糖提取液稀释一定倍数。各取2mL的 水、葡萄糖溶液、柘树叶多糖样品液于具塞试管中。将1mL 5％的苯酚溶液加入其中后，摇 匀，再迅速将5mL的浓硫酸加入其中。充分混合后，90下水浴加热25min。取出试管，冷水浴 冷却3min。以水‑苯酚‑硫酸溶液为参比，用紫外分光光度计对葡萄糖‑苯酚‑硫酸溶液、柘树 叶多糖样品液进行400‑800nm波长扫描，绘制出全波长扫描图。如图3、图4所示，葡萄糖和柘 CN115490776 树叶多糖均在490nm处有最大吸收波长。[0066] (2)称取10mg葡萄糖粉末，加水溶解，将其定容到100mL容量瓶中，作为母液。分别 向七支具塞试管中加入体积为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL的母液，再分别加水补足至 2mL。将1mL 5％的苯酚溶液加入其中，摇匀，再迅速将5mL的浓硫酸加入其中。
充分混合后， 90下水浴加热25min。取出试管，冷水浴冷却3min。490nm下测吸光度，记录数据，绘制葡萄 糖标准曲线如图2所示。 [0067] 实施例3 [0068] 料液比的优化 [0069] 称取0.5g柘树叶粉末(过100目筛)，固定超声温度60，超声时间40min，分别用1: 10、1:20、1:30、1:40的料液比，超声波辅助水浴法提取柘树叶多糖，每个料液比做3次平行 实验，测定柘树叶多糖(CTLP)的得率，最后取平均值。如图5所示，当料液比在1:30时柘树叶 多糖提取的率最高，随着料液比增加到1:40，多糖得率反而降低，因此单因素试验测出最佳 料液比为1:30。 [0070] 实施例4 [0071] 超声温度的优化 [0072] 称取0.5g柘树叶粉末(过100目筛)，固定料液比1:30，超声时间40min，分别在50、 60、70、80下超声波辅助水浴法提取柘树叶多糖，每个温度下做3次平行实验，测定柘树叶
