对蝮亚科毒蛇咬伤的早期症状研究表明,动物血压下降是主要症状之一,但所用的实验材料是粗毒。蝮亚科蛇毒中丰富的酶类及毒性组分使得阐明其降血压机制十分困难,因此必须首先获得能引起降压的纯组分。王玉珍等从尖吻蝮蛇毒中分离出一种纯的降压组分。经测定该组分无蛋白水解酶活性,无pla2活性,无精氨酸酯酶活性,也没有舒缓激狀释放酶、碱性磷酸单酯酸和5'-核昔酸酶活性。在生理活性方面也没有出血、溶血和纤溶活性。纯化方法如下:

DEAE-SephadexA-50柱层析粗毒3g溶于30ml0.lmol/LpH8.0Tris-HCl缓冲液中,离心5min,取上清液加于柱上(4cmX80cm),洗脱曲线见图3-13-23A。用测兔动脉血压的方法检测,峰5有明显降压作用,将此峰收集冻干,约有200mg,每批分离略有差异。

SephadexG-75柱层析将上步得到的峰5浓缩液上SephadexG-75柱(3cmX100cm)平衡洗脱液为

15mol/LNaCl,结果见图3-13-23B。峰2具有降压活性,将其脱盐冻干得50mg,各次结果略有差异。

CM-SephadexC-25柱层析将上步所得峰2组分对醋酸钠缓冲液(pH6.5)透析平衡后上柱(1.5cmX40cm),洗脱过程见图3-13-23C,峰1为降压组分,脱盐冻干得25mg,活性纯化倍数为5倍。

神经生长因子(NGF)是一类感觉和交感神经元生长、发育必需的因子。An-geletti等从印度眼镜蛇毒中分离、纯化了NGF并且测定了这种NGF的氨基酸组成及部分顺序。Server等比较了印度眼镜蛇毒NGF与小鼠颌下腺NGF的结构和功能。蛇毒中的NGF纯化因不同蛇毒而不同,这里介绍雷少波等人从中华眼镜蛇毒中纯化NGF的方法。

SephadexG-50柱层析眼镜蛇粗毒3g溶于10ml1%乙酸溶液中。经3000r/min离心lOmin,上清液上样于45cmX128cm柱。用1%乙酸洗脱,流速32ml/h,8ml/管分部收集。洗脱液在280nm波长测光吸收值,如图3-13-24所示。

CM-Cellulose32柱层析取上一步层析中的活性组分276mg溶于5ml05mol/L乙酸钠缓冲液(PH5.0)中,离心后上样于2.OcmX89cm柱。先用起始缓冲液洗脱,再用0mol/L〜1.Omol/LNaCl凸型梯度洗脱。流速60ml/h,10ml/管分部收集。如图3-13-25所示,可分出3个峰。将各峰分别收集,透析除盐后冷冻干燥。第2峰具有NGF生物活性。

Sephai:ose6B柱层析取第二步中的NGF组分约49.8mg加入2.0ml0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.5)中。离心后上样于2.5cmX160cm柱,用同种缓冲液洗脱,流速为18ml/h,6ml/管分部收集。如图3-13-26所示,可分出2个峰。将各峰分别收集,透析除盐后冷冻干燥,第1峰具有NGF生物学活性,得到NGF纯品约12mg。


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