(四)菌种培养、扩制方法
1.液体菌种培养法 分为摇瓶振荡和发酵罐深层搅拌通气两种方法，现介绍前一种方法。
(1)基本生产设备 在小型生产中，一般用摇瓶机制作液体菌种。常用的摇瓶机有电动往复式和旋转式两种:往复式摇瓶机，振幅(往返距)为8~10厘米，振荡频率80~100次/分(图17);旋转式摇瓶机，利用旋转的偏心轴使托盘摆动。偏心距4厘米,振荡频率150~200次/分(图18)。在无电力的情况下可以用儿童车改制成摇床的床架,以手或脚替代马达的功能，每隔一定的时间有规律地推动1次。
(2)装瓶及灭菌 培养容器可用250毫升，500毫升，1000毫升和5 000毫升的三角烧瓶，培养基的装量为容器的1/5。一般以8层纱布做成8厘米X8厘米的瓶塞,塞人瓶口，并用油纸包扎，在117.77~137.29千帕(1.2~1.4千克/厘米)下灭菌40分钟。灭菌后按无菌操作要求，根据液体培养基的多少，每瓶接入1~4块斜面种(每块0.1~0.5厘米),或接人1%~5%的液体种。接种后用原塞瓶口的纱布展开后盖在瓶口，并用绳扎牢,静置培养1~2天，再置摇瓶机上振荡培养。
2.简易深层发酵扩制菌种 食用菌液体发酵扩制菌种，长势旺盛，菌龄整齐，菌丝生长速度比常规育种快约10倍，麦粒料中，3~5天就能长满瓶。将20%~100%液体菌种拌人栽培料中,平菇、金针菇等10~20天就可出菇，香菇40天也能出菇，能使成本降低，产量提高。但就目前来说，深层发酵设备投资多，技术要求高，大面积推广有困难。根据笔者的实践经验及有关资料，就简易深层发酵扩制菌种的方法向读者做一介绍。
(1)工艺流程
小气量通气装置——滤球(滤棒)过滤器——各级发酵瓶
培养皿试管斜面菌种——一级发酵瓶——二级发酵瓶——三级发酵瓶——液体菌种
(2)设备器材 由气泵、出气管、R弯管、过滤器、玻璃或金属管(管内径3~4毫米)、三角烧瓶或广口瓶、橡皮塞等组成的简易深层发酵装置(图19)。
(3)培养基配方 麦麸20%，玉米粉5%，豆饼粉5%，玉米浆10%，葡萄糖2%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.1%，盐酸硫胺素0.1%，水1 000毫升。pH5~6。麦麸、玉米粉、豆饼粉反复煮2次,取汁配制1000毫升培养液。
(4)操作要点 将液体培养基装人三角烧瓶或广口瓶(装量为瓶容量的7/10左右，200毫升的三角烧瓶可装120毫升),密封。将发酵装置的R弯管、玻璃(金属)管、过滤器、橡皮塞连同烧瓶拆开，分别用牛皮纸包起来，经高压灭菌后，把R弯管与出气管连接起来，待烧瓶冷却后，在无菌条件下去掉橡皮塞，接人2毫米大菌块8~10块，然后静置培养24小时,再通气培养48~96小时，当每毫升培养基中达500个以上菌球(菌丝断片)时，即可压流至二级瓶内发酵扩大培养。再经1~2天后又可压流至三级发酵瓶。扩大量以1:10为宜。各级发酵过程中及发酵终止后均需抽样检查，确保无染杂菌才可扩大培养。
液体菌种用于固体菌种扩大，要在无菌条件下将液体菌种接入固体菌种瓶，每瓶约接人10毫升,每小时可接300瓶左右，然后置适温下培养。
3.简易磁力操拌器的应用 液体菌种在食用菌生产中的用越来越受到重视。培养少量液体菌种大多采用摇瓶机和通气罐，磁力搅拌发酵器近来也有应用(图20)(1)工作原理 磁铁旋转时，产生磁场。 搅拌珠也是一个小愿体，会随磁场转动,因而带动培养液起转动，产生漩涡和气泡，用加氧气的溶解，供菌丝生长需要。因为外包的是耐高温和耐属蚀的聚四氟乙烯,所以可以与培养基一起灭菌。
上海应用技术学院冯立才,以自己创制的简易磁力搅拌器专业生产的摇瓶机进行了试验比较，共试用了9种菌菇。培养基配方:蔗糖2%,玉米细粉2%，豆饼细粉1%，酵母粉1%，pH自然。每100毫升加人豆油5滴，绒布和牛皮纸扎口,121C灭菌20分钟。用500毫升三角烧瓶台式摇瓶机装100毫升.搅拌器500毫升装人了300毫升培养液。摇瓶机转速为200转/分。用同一菌种，培养温度同为25C。作为发酵终点为料液变稠。将瓶静置一段时间，如料液不分层或很少分层作为终止发酵时间，比较结果见表3.
(2)使用的几点说明
第一，制作。自制简易磁力搅拌器所用原料成本仅几十元，开机时噪声远低于摇瓶机，能量消耗也很小(2~3瓦),但应用效果不差，很适合小规模生产者使用(图21).
第二，实际应用时，每次可多配几瓶培养基(瓶中均放入1枚揽拌珠),灭菌冷却后取1瓶接种，待这瓶菌长好后。作为一级种子接人其他几瓶。二级的同期常为一级的1/2，如鸡腿菇一级培养105小时，用种量10%时，二级仅48小时。如有2台设备，则对制种大有帮助(图22-1至图22-3)，
第三，磁力揽拌培养过程中，因菌丝片段小，用注射器配上粗长针头容易吸出，接种比接瓶子方便快捷。
第四，因无加热功能,简易磁力搅拌器只能在适温或控温条件下使用，
4.液体菌种接种方法 液体菌种的接种一般是利用罐压将发酵液从出料管排出,并配备专用接种枪。故事先要将接种枪和
接种管接好，并用8~10层纱布包好，进行彻底灭菌消毒在火焰保护下，将已灭好菌的接种管接到出料口上，另一头与专用接种枪相连。利用罐压进行接种。接种方法有三种形式，一是颈圈与料面之间注人料面，二是菌袋中间多点接种，三是插入内部。
