针对光自养藻类,科学家认为有30个相对重要的因素需要考虑。但营养的供给只是微藻培养的一方面,其他环境因子和培养液搅拌混匀的因素也必须考虑。无论是光自养藻类还是异养微藻,主要的营养因子有碳(C)、氮(N)、磷(P)、硅(Si,硅藻需要)、各类微量元素和维生素,而主要的环境因子有光、温度、pH等。
图3.猜猜这是什么藻
2.营养因子
(1)碳源
微藻中,碳元素的含量一般能占到50%(除灰分外)左右。对光自养微藻而言,要保持高速生长,碳源(尤其是CO2)的供应异常重要。葡萄糖是异养中最常用的有机碳源,另外氨基酸、乙酸和甘油也被用于一些藻类的异养。
(2)氮源
氮源是微藻生长的最重要因子,在微藻细胞中,因微藻种类不同,氮元素的含量在1~10%左右,并因氮源的供给量和可利用度而异,通常情况下,氮源的缺乏导致细胞颜色褪化,叶绿素含量减少。硝酸盐、氨和尿素是最常用的三种氮源,氮源对微藻生长造成的影响因种而异,偏好不一。
(3)磷源
磷是跟微藻细胞生长和代谢密切相关的另一个的元素,尽管它在藻类细胞中所占的比例不超过1%,但它是核酸物质(DNA/ RNA)、ATP、细胞膜的基础组成元素,磷的缺乏会严重影响微藻细胞的生命活动。
(4)硅
硅元素,对硅藻而言是一种重要的元素,它构成硅藻的细胞外壳,是硅藻生长的限制因子之一。在培养中,硅一般以五水偏硅酸钠(Na2SiO3·5H2O)和九水偏硅酸钠(Na2SiO3·9H2O)的形式添加,在水中形成硅酸(Si(OH)4),被细胞吸收后转化为水合氧化硅(SiO2·nH2O)。
(5)其他(微量)元素与维生素
硫(S)、镁(Mg)、钙(Ca)、钾(K)等其他一些(微量)元素也是微藻生长所必须的物质。微藻必需的微量元素还有钼(Mo)、铜(Cu)、钒(V)、钴(Co)、锰(Mn)、锌(Zn)、硼(B)、铁(Fe)等。微藻培养中所需的维生素有B12、B1、生物素等种类,通常自然水体中就有一定含量,具有提升微藻生长的速度的功能。
图4. 在适宜营养及环境因子具备的情况下,自然水域经常见到各色藻华。(澳大利亚Clovelly Beach,由夜光虫形成的藻华)
3.环境因子
(1)光照
对于光自养藻类而言,光是不可或缺的,微藻细胞对光的利用与光强度、细胞密度、光径长度/培养液层厚度和搅拌的剧烈程度都有关系。
(2)温度
温度能影响微藻对营养的需求、新陈代谢的速录和细胞内的组分,因此在微藻培养中需要对其进行控制。如果低于该藻的最适温度,会影响微藻的生长速率,而高于最适问题,则会增加其呼吸作用强度,甚至致死。
(3)pH
微藻的胞内pH依赖一个耗能系统来维持,在非最优pH环境下生长的细胞会加大能量消耗,从而减少了用于生长的能量,降低产率。而水体中CO2, HCO3–和CO3–的含量和比例是维持pH平衡的主要因素。pH会影响微藻对营养物质的吸收和同化。
图5.夜光虫形成的藻华在夜间如梦如幻(2015年5月8日,日本福井县)
4.微藻培养系统
微藻的商业化养殖,要求该藻种易于培养,并能够达到一个合理的养殖规模,因此微藻培养系统的建立不仅需要考虑养殖品种的生物学特性,还要考虑养殖的目的。
微藻培养系统通常分为开放系统和密闭系统,其中密闭系统包括光生物反应器(photobioreactor,PBR)和发酵罐。培养系统的选择,取决于几个因素,包括微藻种类、生长模式、产品形式、产品经济价值和预期用途。培养系统的选择还要考虑微藻的三种营养方式(光自养、异养和兼养),如开放式系统通常只用于光自养藻类,密闭式系统可用于光自养和兼养藻类,而发酵罐系统用来培养可异养的藻类。如表1,对三种培养系统的各自特点进行了罗列。
表1. 不同微藻生产系统的比较
(1)开放式系统
开放系统(如圆池、跑道池池、敞口水箱、湖等)是最粗放的培养系统,依靠阳光作为唯一光源。开放系统最大的优势是造价低廉且运行简单。但是只有有限几种微藻可以在开发式培养系统中养殖生产,比如螺旋藻和小球藻,这些微藻通常具有克制其他微藻繁殖的特征。
图6. 福清新大泽公司位于海南儋州的螺旋藻养殖基地(跑道池)
图7. 东莞绿安奇公司位于广东河源的小球藻养殖基地(圆池)
开放式培养系统的劣势也非常明显,如养殖过程和周边环境的可控性差,因此容易受到污染,生物量难以达到高密度等,产率低且不稳定,成本高。
(2)封闭式光生物反应器
封闭式培养系统能够降低养殖中污染的风险而提高生产的成功率,另外,养殖过程能够得到严密的检测和控制。目前得到应用的密闭式反应器有管道、平板式反应器和气升系统。
使用密闭式系统,能提高光利用效率和细胞密度,从而提高产率。但通常具有单位体积小,建设成本高,运行能耗高等问题。
就目前的技术而言,投资成本和运行成本过大限制了该系统的广泛应用,仅生产高值产物的藻类得以利用此类系统并得到推广,如利用管道式反应器生产含虾青素的雨生红球藻(云南爱生行等)。
图8. 云南石林爱生行公司雨生红球藻养殖基地(管道式)
(3)发酵系统与可异养微藻
发酵系统应用于可异养培养的微藻生产。此系统最初开发应用于细菌和酵母等微生物的生产,多年的发展已经使得此系统非常的完善,在世界范围内的应用非常广泛,规模巨大。异养系统的优势在于制造和运行技术成熟,可推广应用至所有可异养的种类,不需要光,系统集成度高,无地域限制,土地需求小。但发酵系统在微藻中的应用也存在一些劣势,如仅有少部分微藻种类(如小球藻、寇氏隐甲藻)能够进行异养,运行中依然存在染菌问题,微藻对有机物的耐受浓度低,容易受到抑制,异养条件下,藻类的细胞组分发生变化,尤其是一些需要有光存在的条件下才能富集的物质含量减少(如异养培养的小球藻蛋白含量偏低,且无光导致叶绿素含量明显减少)。
图9. 一张小球藻产品的宣传图片,藻粉颜色绿中带黄,明显为异养发酵生产的小球藻,纯光养的小球藻为墨绿色。
图10. 光语公司研发的实验用管道式微藻光生物反应器
微藻异养技术已经在多种微藻中实现(如表2所列多种可异养微藻种类),甚至已经应用于部分种类的规模化生产。虽然发酵系统一向被认为建设投入大、运行成本高,但在规模达到一定程度后,依然可以将生产成本降低到可接受,甚至会低于光自养的生产成本。
表2. 可异养微藻种类及应用
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说到养殖系统的事,关心的人很多,总在比较这个好还是那个好,未来用什么模式合适之类的。在老俞看来,没这个好那个好的问题,就是个合适不合适的问题。往大了说,涉及到资源和目标关系,站国家角度可能更看中资源的利用效率,站个人和企业的角度就要考虑成本和收益,个体户、小企业和大企业各自的立足点也不同,所以采用哪种模式,真的没法一言而定。如澳大利亚养殖盐藻,有大片的天然盐湖可以利用,产率低含量低都不算个事;而以色列的盐藻养殖就得去修跑道池;以色列和云南的红球藻利用管道养殖,而日本富士甚至有采用室内人工光源的反应器;如管道培养的小球藻相对质量稳定,即使成本高,却有充足的理由喊高价。
所以在说哪种系统好,或者合适之前,先回答以下一些问题:要开发哪个藻种?该藻种有什么生物学特性?产品准备用于开发什么产品,卖给哪个客户人群?总市场容量有多少?打算占有多少市场容量?技术门槛和资金门槛准备提到多高?准备在行业内做最大还是最强?手头钱多地少,还是有现成的大片土地?水电资源及原料是否丰富?有没有可靠的技术团队作为支撑等等。
俞建中
2017年01月22日
俞建中博士系列藻类科普文章链接:
光语带你认识微藻 第一篇——什么是微藻
光语带你认识微藻 第二篇——微藻的商业化开发和应用
光语带你认识微藻 第三篇——微藻培养简介
光语带你认识微藻 第四篇——紫球藻
光语带你认识微藻 第五篇——雨生红球藻
光语带你认识微藻 第六篇——虾青素与其功效
光语带你认识微藻 第七篇——盐藻与β-胡萝卜素
光语带你认识微藻 第八篇——地木耳、发菜和葛仙米
光语带你认识微藻 第九篇——微藻与不饱和脂肪酸
光语带你认识微藻 第十篇——裸藻(Euglena)
光语带你认识微藻 第十一篇——螺旋藻(一)
光语带你认识微藻 第十二篇—— 小球藻