酶促反应的影响因素实验报告实验报告-不同因素对酶的影响课程名称：生物化学实验（甲）指导老师：成绩：实验名称：酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型：分离鉴定实验同组学生姓名：****目的和要求（必填）七、讨论、心得二、实验内容和原理（必填）四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析（必填）了解酶的专一性。2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方是一种具有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于型糖而不能作用于L-型的糖。
本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉Na2CO3+2H2O2NaOHH2CO3CuSO4+Na2SO4还原糖(—CHO2Cu(OH)2Cu2O(砖红色或黄色)与Benedict试剂无呈色反应。淀粉被淀粉酶水解，产物为葡萄糖；蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，其产物为果糖和葡萄糖，它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。1、实验材料蔗糖酶(样品）；新鲜唾液（含唾液淀粉酶）；2、实验试剂蔗糖酶液蔗糖酶液(样品）加蒸馏水适当稀释，备用；唾液淀粉酶液（学生自制）取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸馏水（稀释）到25ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50～400倍，甚至更高；5%蔗糖（A.R.）溶液；0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）；Benedict试剂；四、实验器材与仪器1.漏斗，2.脱脂棉花；3.恒温水浴（37，100）；4.量筒；5.试管；6.烧杯；7.吸量管。
注：1、检查目的：试剂是否有干扰因素存在。2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在，请自己设计。淀粉酶的专一性注：可增加一组蔗糖酶液经100加热3min处理后的样品对号蓝绿色，2号蓝色，Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄糖，说明在不加酶时，淀粉和蔗糖不易水解。试剂无干扰因素的存在。号土黄色，2号黄绿色，3号蓝色加入唾液淀粉酶，1号试管底物是淀粉，所以很容易水解成葡Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以号颜色变化比较大。（2号可能是因为蔗糖在37恒温水浴中也有少部分水解，所以颜色变化，但变化不明显。）总的来看可以看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有对淀粉的底物专一性。3号是对照。号红棕色，3号蓝色加入蔗糖酶，2号试管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以2号颜色变化比较大。（1号可能是因为淀粉在37恒温水浴中也有部分水解，所以有颜色变化，但变化不明显。
）从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解有催化作用，对淀粉无催化作用，具有对蔗糖的底物专一性。3号是对照。七、思考题1．观察酶专一性实验为什么要设计这组实验？每组各有何意义？蒸馏水有何用？第一组作为整个实验的空白对照组，检测Benedict试剂对实验结果的颜色有何影响，排除干扰因素的存在。第二组作为检测淀粉酶的专一性实验组，第三组作为检测蔗糖酶的专一性的实验组。蒸馏水作为每一个组中的空白对照，与组内其余两组进行对照。2．将酶液煮沸10min后，重做二、三的操作，观察有何结果？各试管都为蓝色，因为酶在煮沸过程中已经变性，失去催化活性，故不能催化各自对应底物的水解反应。3．在此实验中，为什么要用0.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液？0.3%NaCl的作用是什么？0.3%NaCl中的Cl是作为激活剂激活唾液淀粉酶的活性，使实验结果不至于因为唾液淀粉酶的活性不足而导致不同。八、注意事项1.试管要干净，所有试剂加量准确，加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染；试剂用好瓶盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。以免实验结果的错了解激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响。2.学习检定激活剂和抑制剂影响酶促反应速度的原理和方法。
二、实验基本原在酶促反应过程中，酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂；某些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团（主要是指酶活性中心上的一些基团）发生变化，因而引起酶活力下降，甚至丧失，致使酶反应速度降低，称为酶的抑制剂。酶的激活剂种类：1、一些简单的无机离子，如Mg2+、Cl-等；2、一些中等大小的有机分子，如抗坏血酸等也是激活剂，它们对某些含巯基的酶具有激活作用；3、有些酶的催化作用易受某些抑制剂的影响，因而能除去抑制剂的物质也可称为激活剂，如EDTA能除去重金属，因而能解除重金属对酶的抑制作用。4、具有蛋白质性质的大分子物质，这些激活剂是指可对某些无活性的酶原起作用的酶。酶的抑制剂有许多种：如重金属离子（Ag+、Hg2+、Pb2＋、Cu2＋等）、CO、氯化物、H2S、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，各种激活剂对酶的作用是不同的。本实验利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活或抑制现象。
淀粉经酶促水解为葡萄糖的不同阶段的产物与碘作用的颜色反应如下：本实验中，Cl-为唾液淀粉酶的激活剂；Cu2+为唾液淀粉酶的抑制剂。利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同的呈色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活和抑制现象。水解的程度是通过水解混合物遇碘溶液所呈现的颜色之变化来判断的。1、实验材料新鲜唾液2、实验试剂唾液淀粉酶（学生自制）取唾液1ml25ml量筒中，用蒸馏水稀释至25ml，用棉花过滤备用。唾液稀释倍数因人而异，可稀释50～400倍，甚至更高。0.1%淀粉溶液1.0%氯化钠溶液1.0% 硫酸铜溶液 1.0% 硫酸钠溶液 碘化钾-碘液四、实验器材与仪器 1.试管及试管架2.量筒 3.漏斗 4.脱脂棉花 5.点滴板 6.吸量管 恒温水浴（37）五、实验操作方法和步骤 取试管4支，按下表操作： 注意：找出准确的保温时间，是本实验是实验能否成功的 关键步骤之一，唾液淀粉酶液浓度可根据个人情况而定，通过37 水浴溶保温计时，反应时间最好在8～15min 以内，只有确定准确 的保温时间才能进行实验。 加入酶液后，务必充分摇匀，保证酶与全部淀粉液接触的 反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。
（3）碘化钾–碘液不要过早地加到点滴板上，以免碘液挥发，影响显色效果。 号试管为蓝紫色，2号为浅黄色，3 号为 褐色，4 号为浅褐色。 中颜色最深，说明CuSO 中颜色最浅，基本呈碘色，故淀粉酶活性最高，说明 NaCl 可以激活淀粉酶的活性；试管 中颜色基本一致，且深浅居 于试管1、2 之间，淀粉酶活性一般，说明Na+、SO 对淀粉酶活性都没有 影响。故总体上看，可以得出Cl 是唾液淀粉酶的激活剂，Cu 激活剂可分哪几类？本实验中NaCl、硫酸铜是 属于哪种类型？ 激活剂可分为：简单无机离子、中等大小有机分子、能除去抑制剂的物质、具有蛋白质性质的大分子物质等。NaCl 属于简单无 机离子；CuSO4 属于重金属抑制剂。 本实验中，1，2，3，4管各有何用意？为什么要设计第3 管可观察抑制剂对反应影响的现象，2管可观察激活剂对反应 影响的现象，第3 管可以将1 管中的Na 管中的SO4对反应 的影响去除，4 管作为空白对照。 抑制剂只改变酶的催化活性，并不使蛋白质变性，其影响是可逆的；变性剂破坏了蛋白质的高级结构，使蛋白质变性，并且多 数变性剂的影响是不可逆的。如：Cu 是唾液淀粉酶的抑制剂，但 如果将 Cu 去除淀粉酶的活性又可以变为正常水平。
八、注意事 1.试管要干净，所有试剂加量准确，加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染，以免实验结果的错误。 3.试剂用好瓶盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。4.两种淀粉 不要弄错。5.激活剂抑制剂实验中，注意运用点滴板（显色板） 来控制保温时间； 1，2，3，4管颜色反应无明显差别，可能 是唾流淀粉酶活力太高或太低，若酶活性太高可将酶稀释后重做； 若酶活性太低，可延长保温时间或增加酶的浓度。 了解温度对酶活力的影响；2.学习测定最适温度的原理和方
