温度对酶活性的影响实验报告温度、PH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响（一）、温度、PH对酶活性的影响一、实验目的了解温度对酶活性的影响。了解酶活性的最适PH及掌握一种检测最适PH的方法。二、实验原理三、实验步骤0.2%淀粉溶液稀释唾液/ml1.51.51.5号两试管放入37摄氏度恒温水浴中，2取出，将2号试管内的液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验号试管剩下的一半溶液放入37摄氏度水浴中继续保温10min后，再用碘液检验，结果如何？记录并解释结果。唾液制备时，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一小口蒸馏水，0.5~1minPH对酶活性的影响个标有号码的20ml试管。用吸管按下表添加0.2mol/L酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液以制备PH=5.0~8.00.2mol/L磷酸氢二钠/ml0.1mol/L柠檬酸/mlPH5.154.856.057.723.952.285.86.89.720.28个试管中各取缓冲液3ml，分别注入到支带有号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5%淀粉溶液2ml和稀释唾液2ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔分别为1min。将各试管内容物混匀，并依次置于37摄氏度恒温水浴中保温。
第四管加入唾液2min后，每隔1min由第二管取出一滴混合液，滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管中依次添加1滴碘化钾-碘溶液。添加碘化钾-碘溶液的时间间隔从第一管起，均为1min。观察各试管内容物呈现的颜色，分析PH对唾液淀粉酶活性的影从第三管中取混合液，是因为它的PH接近唾液淀粉酶的最适PH。间隔1min，是为了有足够的时间去加稀释唾液和足够时间观察颜色，保证各四、实验结果1、温度酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。唾液淀粉酶的最适温度为37摄氏度。低温抑制酶的活性，高温使酶失活。淀粉遇碘显蓝色，按其分解程度由低到高会依次出现蓝色、紫色、暗褐色、无色。所以可用碘来检验其水解程度。PH也能影响酶的活性，在最适PH下，酶的活性最大，偏酸、偏碱都降低酶的活性，唾液淀粉酶的最适PH为6.8。（二）、激活剂和抑制剂对酶活性的影响一、实验目的了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响。二、实验原理0.1%淀粉溶液/ml1.51.51.51.51%CuSO4溶液/ml0.51%Nacl溶液/ml1%Na2SO4溶液/ml0.5稀释唾液/ml0.50.50.50.537摄氏度恒温水浴5min酶的活性受激活剂或抑制剂的影响。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。激活剂使酶的活性升高，抑制剂使酶活性降低。加入Na2SO4是为了消除Na+和SO42-对酶活性的影响。“新陈代谢与酶”是高中生物学的一个重要内容，学生必须通过实验探究酶的活性及其特征，为此，我先后尝试用唾液淀粉酶催化淀粉水解，过氧化氢酶催化H2O2分解来研究温度和PH酶活性的影响，但实验效果不佳，于是我对此实验作了改进，取得了良好的实验效果，其具体实验方案如下：2、探索a—淀粉酶不同温度下催化淀粉水解的情况。二、实验原理淀粉遇碘后，形成蓝紫色复合物，a—淀粉酶可以催化淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖，麦芽糖和葡萄糖遇碘后不显色。试管12支，试管刷1把，试管架1个，刻度吸管2支，恒温水台（水温分别保持在60、100）、塑料烧杯1个（冻冰），铅笔1支，1%淀粉溶液，0.1%a—淀粉酶溶液，卢戈氏碘液，蒸馏2、课前90min，打开2个温水浴箱，并调好温度。五、实验步骤和实验记录在不同温度下，a-淀粉酶的活性不同，低于最适温度，a-淀粉酶的活性没有全部释放，高于最适温度a-淀粉酶的活性随着温度的升高而消失。从以上实验表格可知，在2时，a-淀粉酶的活性最低，几乎没有活性，在60时，a-淀粉酶的活性最高，即60为最适温度，在96时，a-淀粉酶活性完全丧失。
1）对照组均为深蓝色，实验组中冰水组颜色为深棕色，60时为黄色，100时为深蓝色。2）水浴箱水温100时，敞开盖后只能维持96。所以测定的是96下酶的活性，但也可以观察到明显现象。3）水浴锅要保持水温60时，应设定在61，敞开盖时的实际温度为60.1左右。课程名称：生物化学实验（甲）指导老师：成绩：实验名称：酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型：分离鉴定实验同组学生姓名：****目的和要求（必填）七、讨论、心得二、实验内容和原理（必填）四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析（必填）了解酶的专一性。2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方是一种具有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。
如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于型糖而不能作用于L-型的糖。本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉Na2CO3+2H2O2NaOHH2CO3CuSO4+Na2SO4还原糖(—CHO2Cu(OH)2Cu2O(砖红色或黄色)与Benedict试剂无呈色反应。淀粉被淀粉酶水解，产物为葡萄糖；蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，其产物为果糖和葡萄糖，它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。1、实验材料蔗糖酶(样品）；新鲜唾液（含唾液淀粉酶）；2、实验试剂蔗糖酶液蔗糖酶液(样品）加蒸馏水适当稀释，备用；唾液淀粉酶液（学生自制）取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸馏水（稀释）到25ml，用棉花过滤备用。
唾液稀倍数因人而异，可稀释50～400倍，甚至更高；5%蔗糖（A.R.）溶液；0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）；Benedict试剂；四、实验器材与仪器1.漏斗，2.脱脂棉花；3.恒温水浴（37，100）；4.量筒；5.试管；6.烧杯；7.吸量管。注：1、检查目的：试剂是否有干扰因素存在。2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在，请自己设计。淀粉酶的专一性 注：可增加一组蔗糖酶液经100加热3min 处理后的样品对 号蓝绿色，2号蓝色， Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还 原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉 只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄糖，说明在不加酶时，淀粉和蔗糖不易水解。试剂无干扰因素的存在。 号土黄色，2号黄绿色，3 号蓝色 加入唾液淀粉酶，1号试管底物是淀粉，所以很容易水解成葡 Benedict试剂共热，即产生红棕色 Cu2O 沉淀。所以 号颜色变化比较大。（2号可能是因为蔗糖在37恒温水浴中也有 少部分水解，所以颜色变化，但变化不明显。）总的来看可以看出 唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有对淀 粉的底物专一性。3 号是对照。 号红棕色，3号蓝色 加入蔗糖酶，2号试管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和 葡萄糖，与Benedict 试剂共热，即产生红棕色Cu2O 沉淀。所以2 号颜色变化比较大。（1 号可能是因为淀粉在37恒温水浴中也有 部分水解，所以有颜色变化，但变化不明显。）从这三支试管看出
