一、实验目的:通过实际操作，掌握大、小鼠的一般操作方法，包括大、小鼠的抓取和固定、性别鉴定、给药、采血。雄）、灌胃器2个、注射器4个、酒精、棉球、生理盐水、小鼠固1.1抓取：左手抓小鼠的尾根部1.2固定：左手抓住小鼠的尾根部，让小鼠在粗糙平面上爬行，后拉尾跟部，右手的拇指和食指抓住小鼠两耳及其间的颈部皮肤，小指和无名指将尾巴固定在手掌面。1.3同样操作将大鼠抓取和固定2.1抓取和固定小鼠2.2观察肛门与生殖器间的距离和二者之间的毛发。雄性：距离长，毛发密（和其他部位一样）；雌性：距离短，毛发稀疏。2.3同样鉴别方法，重复鉴别大鼠。3.1灌胃法3.1.1按正确方法用左手抓取和固定小鼠，使腹部朝上，颈部拉3.1.2固定后，右手持持接灌胃针的注射器吸取药液（或事先将药液吸好），将针头从口角插入口腔内，然后用灌胃针头压其头部，使口腔与食管成一直线，再将灌胃针头沿上腭壁轻轻进入，转动针头刺激动物吞咽，然后沿咽后壁慢慢插入食道。3.1.3当感觉有落空感时表明灌胃针可能进入胃内，向外抽动注射器活塞，感觉有负压，此时可将药液灌入。3.1.3用大鼠重复同样操作3.2注射给药3.2.1皮下注射3.2.1.1用左手拇指和食指轻轻提起动物颈后肩胛间皮肤，3.2.1.2右手持注射器，使针头水平刺入皮下，针头能自由拨动无牵阻，推送药液时注射部位隆起。

拨针时，以手指捏住针刺部3.2.1.3用大鼠重复同样操作3.2.2腹腔注射3.2.2.1以左手固定小鼠，使腹部向上，3.2.2.2右手持注射器从下腹两侧向头方刺入皮下，针头稍向前，再将注射器沿45角斜向穿过腹肌进入腹腔，此时有落空感，回抽无回血或尿液，即可注入药液。3.2.2.3用大鼠重复同样操作3.2.3尾静脉注射3.2.3.1先将动物固定在暴露尾部的固定器内，3.2.3.3以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧，用中指从下面托起鼠，右手持注射器，使针头尽量采取与尾部平行的角度进针，从尾末端处刺入。3.2.3.4注入药液，无阻力，表示针头已进入静脉，注射后把尾部向注射侧弯曲，或拔针后随即以干棉球按住注射部位以止血。3.2.3.4用大鼠重复同样操作4.1.1左手固定小鼠，食指和拇指轻轻压迫颈部两侧，使眶后动静脉充血。4.1.2右手持毛细采血管，以45度从内眼刺入，并向下旋转，感觉刺入血管后，再向外边退边吸，使血液顺承血管自由流入小4.1.3当得到0.5ml血量后，放松加于颈部的压力，并拔出采血器，以防穿刺孔出血4.1.4用大鼠重复同样操作小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。大鼠抓取方法基本同小鼠，抓大鼠时若操作者不熟练，或者大鼠特别凶猛，操作者最好戴上防护手套(帆布或硬皮质均可)。

如若是灌胃、腹腔注射、肌肉和皮下注射时，可采用与小鼠相同的手法2.1尾静脉注射时，可用45~50度的温水浸润半分钟或用酒精擦2.2如反复注入，应尽可能从尾末端开始，以后向尾根部方向移动注射先远后尽，不要一开始就从尾根部，失败了无法选取注射部位；再次，进血管后注意保持稳定，针尖很容易刺穿血管的。2.3尾静脉就在尾巴的正左右两边，先用酒精用力擦，可以去掉部分角质，然后按住近心端让充血，就很容易看到了。3.1针头插入食道过程中，若动物挣扎厉害，应退出后灌胃针，待动物安静后重新插入。切不可强行插入，以免损伤食道或误入气管导致动物死亡。3.2当感觉有落空感时表明灌胃针可能进入胃内，向外抽动注射器活塞，感觉有负压说明灌胃针未插入气管，此时可将药液灌入。二、操作流程：抓取，固定，编号，给药，取血，麻醉，绝育，解剖。1、抓取：抓取小鼠时，右手抓住小鼠尾巴，不要过于用力，以免惊吓小鼠。左手从小鼠身体后部向前抓（以免小鼠向后缩咬伤自己），抓住小鼠颈部。固定住小鼠后，将小鼠皮肤往上抓，尽量将小鼠背部皮肤抓住。左手将小鼠腹部朝向自己，把小鼠尾巴用左手无名指和小指夹住，这时小鼠腹部皮肤紧绷，不能动弹。2、固定：通常使用固定器进行固定。

将固定器拧开后，抓住小鼠尾巴，使其钻入固定器中，再将拧下的固定器部分装好，使小鼠尾部露出，再将可旋转的铁片固定住即可进行后续实验。3、编号：编号方式有两种：剪脚趾编号：把小鼠腹面朝上，在下的脚趾从左至右依次编为1~1010号脚趾加趾依次编为11~19号，在上的脚趾依次编为20,30,40,50,60,70,80,90号，其余编号与11~19号类似。打耳钉编号：耳钉上均有唯一编号，通过使用耳钉钳将耳钉打在小鼠耳朵上即可。实验时通常使用的是第一种方式进行编号，第二种编号通常用于需要长距离运输的动物。口服给药：即灌胃。将注射器装入药物溶液，装上灌胃针（灌胃针有直头和弯头两种，区别不大）。如上所述，抓取小鼠后，使其头部朝上，尽量呈一直线，取灌胃针，从小鼠嘴角一侧缓缓插入（保持刻度在自己能看到的位置），顺着小鼠口腔食道的弧度让小鼠将针咽入，灌胃过程中如果遇到阻碍一定要及时拔出灌胃针，不可强行灌胃以免伤及小鼠食道以及肺部。灌胃针顺利进入后基本与小鼠身体呈一条直线，注入适量体积后再顺着食道缓缓取出灌胃针。条动脉，3条静脉非别位于背部，及两侧。静脉注射时一般选取两侧静脉，因为其相对于背部静脉更为清晰饱满。

将小鼠固定后，用酒精擦拭其尾部静脉，使其充血，以便注射。之后使注射器针孔处朝上，针与尾部呈约30扎入尾部后向上轻挑，再向内扎入部分，此过程应该比较顺畅，没有阻碍，若阻碍较大则有可能扎入到了皮肤中。扎入后将活塞向后回抽一点可见到有血回流，则说明成功扎入静脉当中，注射适当体积后迅速拔针，用酒精进行消毒。5、取血：有断尾取血法和眼眶取血法两种。本次实验使用的是眼眶取血法。抓取小鼠，固定其头部用手指将其上下眼睑分开，露出其眼球并且不能闭上。用玻璃毛细管从其上眼角处扎入眼球后方毛细血管从，使血液顺着毛细管留下，取血完成后快速将毛细管取下。6、麻醉：抓取老鼠，使其头部朝下，使其腹部脏器向胸腔靠拢，露出腹部空腔，以免刺伤脏器。将注射器竖直扎入靠近后腿部腹腔，刺入之后稍微向前倾斜但不要向前刺入，一般注入0.5mL7、绝育：绝育手术是通过剪除雌鼠卵巢或雄鼠输精管来实现的。将麻醉的雌鼠背面朝上，从其胸腔和尾部之间向下三分之一处剪开一个小口，用镊子将其卵巢取出，上面呈现红色斑点的部分即为卵巢，用剪刀将这一部分剪除，然后用缝合针线将其缝合，缝合方法为将针穿过后，将线缠绕镊子两圈再逆时针缠绕两圈，再重复缠绕一遍，将镊子夹住线头把缠绕的线移至线头系紧即可（缝合过程全程用镊子和剪刀操作），里面肌肉层以及外面皮层均需缝合。

雄鼠则从外生殖器向上1-2cm处剪开小口，用镊子在其中找出输精管（较细长的乳白色小管），尽量多减掉一些，以免其长长愈合，以上述方法缝合伤口即可。9、解剖：以颈椎脱臼法处死小鼠，使其腹面朝上。用镊子将其腹部皮肤夹起，然后用剪刀剪开，观察各个器官所在位置和形态，解剖完的小鼠放入尸体袋中。通过实际操作，掌握小鼠实验的一般操作方法，包括动物的抓取和保定、性别鉴定、编号、给药、麻醉、采血、处死、解剖等 方法。 先用右手将小鼠的尾巴提起，至于鼠笼或粗糙的平面上，当小鼠向前挣扎行进时，再用左手的拇指和示指捏住小鼠两耳后颈部 皮肤，翻转小鼠至于掌心，拉直后肢。以小指拉住小鼠尾巴即可。 在一些特殊的实验中，如进行尾静脉注射时，可使用专门的小鼠 固定器进行保定。 将小鼠抓取后，观察其肛门及生殖器之间的距离，距离远的为雄性，距离近的为雌性。另外翻转小鼠观察生殖器附近，性成熟 的雄性小鼠的睾丸降至阴囊内，会有明显的突起；雌性小鼠的肛 门至会阴处有一条无毛覆盖的细线。 （1）灌胃法：左手固定小鼠，右手持灌胃器，将灌胃针从小鼠的一侧犬齿缺失处插入口中，灌胃针竖起靠向口腔后壁，使小鼠 消化道成直线，沿咽喉壁缓慢插入食管，使其前段到达膈肌位置， 灌胃针插入时应无阻力，如有阻力或动物挣扎则应退针或将针拔 出，以免损伤、穿破食管或误入气管。

在本次实验中，我们小组使用的是眼眶后静脉丛穿刺采血、尾静脉切割采血、摘眼球采血法、心脏采血。 2.常用全身麻醉剂：乙醚、苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、硫喷妥钠、巴比妥钠、氨基甲酸乙酯。 在本次实验中，对小鼠采用腹腔注射麻醉，方法与腹腔注射给药一样，麻醉剂是 2%水合氯醛，剂量为 400mg/kg，注射量为 0.5ml/25g。 在本次实验中，在小鼠尾巴上切取长8mm，宽 3mm 的皮肤， 切取效果不好。 解剖步骤如下：动物尸体取仰卧位，将四肢固定，用水浸湿被毛。从下颌中央开始到耻骨联合正中垂直切口，用骨剪把左右肋 骨剪断后，将胸骨向前下方翻开，即可暴露胸、腹腔。按胸腔、 腹腔、颅腔的次序观察各脏器的位置、形状及彼此相互关系，然 后分别取下。先在胸腔入口处切断食管和气管，将心和肺一起取 出；再依次摘除腹部脏器脾、肝、肾上腺、肾、胃、肠和盆腔器 官，分别进行各脏器的检查。