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黑木耳母种培养基配制

1.固体菌种生产：

固体菌种是菌丝体生长在固体培养基中而形成的固体形态菌种。 试管母种（1级种） 菌种通常被分为3级。1级种也叫母种或试管种，可用组织分离法或孢子分离法获得母种。2级种也叫原种，是利用母种的菌丝体接入木屑培养基中所产生的菌种。3级种也叫栽培种，是利用原种再扩繁一次所产生的菌种，它直接用于生产，因此也叫生产种。 经过母种—原种—栽培种的不断扩大繁殖后，菌丝体的数量越来越多，越来越强壮，利用这样的菌丝体投入生产就可以生长出优良的子实体。

母种培养基的配制：

（1）常用配方：马铃薯200克、白糖20克、琼脂20克、水1000毫升。为了强化营养，有条件的生产者可在上述培养基中添加蛋白胨3.0克、磷酸二氢钾3.0克、硫酸镁1.5克。

（2）配制方法：首先把马铃薯削皮、切片、水煮，八分熟后取其汁液，再将汁液小火加热，放入琼脂、白糖。溶化后把培养基装入规格为18毫米×180毫米的试管中，装入高度为管长的1/4或1/5为适宜。分装后试管塞紧棉塞，每7支捆成1捆，用牛皮纸包扎，准备灭菌。

（3）培养基灭菌：用手提式高压蒸汽灭菌锅或家用高压锅灭菌，在0.12兆帕压力下（锅内温度121℃）灭菌40分钟。待温度降至60℃时取出摆斜面，斜面长度最好占管长的2/3左右比较合适。

2.菌种分离与扩大培养：

菌种分离方法有孢子分离法、组织分离法、耳木分离法。孢子分离法是选用当年生无杂菌污染的鲜耳片，以黑、厚、大为佳，经无菌水冲洗几次，用丝线将耳片腹面向下吊挂，另一端吊挂在装有培养基的三角瓶口部，加棉塞封口，在25～28℃温箱中接收孢子并培养成菌丝体。组织分离法是选用优质耳片，表面用75%酒精棉球擦拭2～3遍，用酒精棉包住耳片约2分钟，剪取远离耳基没有筋的部位约0.2平方厘米。在无菌条件下，接入试管斜面培养基上，经28℃左右的温度培养长出菌丝体。

耳木分离法是从黑木耳的段木中分离菌丝体获得菌种的方法。切取火柴头大小的木块，经过消毒，在无菌条件下接入试管斜面，经25～28℃的培养就能长出菌丝体。在菌种分离时，要在接种箱中或接种室超净工作台上进行无菌操作，防止杂菌污染。分离几天后在试管斜面上就会长出白色的绒毛状黑木耳菌丝。经过10天左右的培养，菌丝可长满斜面，这就是母种。分离成功的试管母种，还可以在试管斜面培养基上扩大繁殖1～3次，这个过程称为转管或扩管，也叫传代。一般1支母种可转30～40支母种，从而满足生产上的需要。

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